[发明专利]一种乙醇耐受纤维素内切酶的连续多批次发酵方法

摘要

本发明公开了一种乙醇耐受纤维素内切酶的连续多批次发酵方法，属于酶工程以及发酵工程领域。本发明方法包括如下步骤：使用培养基将黑曲霉孢子调为一定浓度的孢子液，将孢子液均匀喷洒到灭菌后的柱状活性碳上，培养后得到初步活化的柱状活性碳；将初步活化的柱状活性碳加到发酵设备浅盘罐的浅盘中，通入培养基，通过控制空气进口管A、B、C的空气流量促进培养基中氧气的溶解，发酵期间加入葡糖糖以及活性碳纳米粉末，按照一定工艺进行发酵得到发酵醪液；重复发酵多批次。本发明利用新型的发酵设备、柱状活性碳作为黑曲霉菌丝的载体，以及活性碳纳米粉末减轻葡萄糖的反馈抑制作用，达到了持续不断高强度产生乙醇耐受纤维素内切酶的目的。

主权项

一种乙醇耐受纤维素内切酶的连续多批次发酵方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)黑曲霉孢子接种柱状活性碳使用培养基将黑曲霉孢子调为浓度1‑1.5×108/mL的孢子液，将孢子液均匀喷洒到灭菌后的柱状活性碳上，在30‑35℃培养20‑24h，得到初步活化的柱状活性碳；(2)使用发酵设备浅盘罐进行发酵第一批次发酵：从固体物料加入管接入初步活化的柱状活性碳到浅盘中；开启涡轮泵一，打开进口阀，向第一个浅盘中加入发酵培养基，当浅盘的培养基溢出后，停止向第一个浅盘加入培养基，开始向第二个浅盘加入培养基，依次类推，所有浅盘都加满培养基，当浅盘罐底部发酵培养基液面达到标准线时，开启出口阀，让所有管道内充满发酵培养基，关闭进口阀；涡轮泵二一直开启，让发酵培养基的流速为25‑30L/min，同时开启空气进口管A、B、C的阀门，调节空气流量，将空气进口管A通气量调为8‑10L/min、空气进口管B通气量调为3‑4L/min、空气进口管C通气量调为2‑3L/min，发酵1.5‑2d；从液体进口管向整个发酵体系加入葡糖糖使其浓度达到2‑3g/L，加入活性碳纳米粉末使其浓度达到40‑50g/L，将空气进口管A通气量调为6‑8L/min、空气进口管B通气量调为2‑3L/min、空气进口管C通气量调为0.5‑1L/min，发酵2‑3d；从液体进口管向整个发酵体系加入葡糖糖使其浓度达到2‑3g/L，加入活性碳纳米粉末使其浓度达到40‑50g/L，将空气进口管A通气量调为4‑5L/min，空气进口管B通气量调为1‑1.5L/min，空气进口管C通气量调为0.5‑0.6L/min，发酵1‑2d，得到成熟的发酵醪液，打开出料口，放出第一批次发酵醪液，活化的柱状活性碳被滤网拦截在浅盘中用于下一批次的发酵；按照第一批次发酵的操作，进行第二批次、第三批次、第四批次、第五批次发酵。