[发明专利]一种基于活性炭和柠檬酸的烟草外植体防褐化方法

摘要

本发明涉及一种基于活性炭和柠檬酸的烟草外植体防褐化方法，包括如下步骤：步骤（1），种子的消毒；步骤（2），种子培养；步骤（3），烟草外植体预培养；步骤（4），烟草外植体组织培养；步骤（5），外植体防褐化培养；本发明将多种防褐化手段有效结合，彼此作用，不仅防褐化效果更佳，还使得生根天数大幅度缩短，外植体褐化率为9.9‑15.9%，外植体7‑10天生根，培养40‑46天，根长＞1cm，根数≥2条，效果良好。

主权项

一种基于活性炭和柠檬酸的烟草外植体防褐化方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤（1），种子的消毒；步骤（2），种子培养：将步骤（1）得到的种子接种到MS培养基中培养，种子发芽长成外植体幼苗，然后用浸泡过生土豆的水涂覆外植体幼苗表面；种子的培养条件为：在培养温度为25±1℃，光照强度30‑50μmol/(m²·s)，光照时间为16h/d的条件下培养60d；步骤（3），烟草外植体预培养：将步骤（2）中得到的外植体幼苗转移并接种于添加有10‑15g/L核桃粒且包括有MS基本培养基、4g/L琼脂、30g/L蔗糖的MS预培养固体培养基中培养，控制温度为24℃，光照强度为1500lux，光照时间为10小时/天，培养时间为3天，最后将得到预培养后的外植体，反复接种于MS培养基4‑5次，使组织中的酚类物质部分渗入培养基；步骤（4），烟草外植体组织培养：将步骤（3）中得到的外植体置于MS分化培养基中培养，控制白天温度为28℃，夜间温度为25℃，光照强度为30‑50μmol/(m²·s)，光照时间为16小时/天，培养时间为7天，得到外植体愈伤组织；步骤（5），外植体防褐化培养：将步骤（4）中得到的外植体置于MS防褐化培养基中，控制白天温度为28℃，夜间温度为25℃，光照强度为30‑50μmol/(m²·s)，光照时间为16小时/天，培养时间为40天；MS防褐化培养基为MS基本培养基中添加0.3‑1.0g/L活性炭、4‑8mg/L柠檬酸、30g/L蔗糖和4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.7。