[发明专利]一种骨髓染色体G带的制作方法

摘要

本发明公开了一种骨髓染色体G带的制作方法，包括以下步骤：(1)进行骨髓白细胞计数，根据白细胞计数结果确定骨髓血的接种量和培养时间；(2)将骨髓血接种到骨髓细胞培养基中进行培养；(3)向骨髓细胞培养基中加入秋水仙素，终止培养；(4)收取骨髓细胞培养物，将其配制成细胞悬液，调节细胞悬液的浊度为2‑3个麦氏浊度；(5)将细胞悬液滴于玻片上，然后将玻片过火，过火时间为10‑15s，过火后再进行烘烤；(6)将烘烤后的玻片采用胰蛋白酶进行处理，然后采用姬姆萨染料染色，即获得具有G显带的染色体标本。采用本发明的方法制作的骨髓染色体呈长棒状，分散良好无交叉，显带清晰。 1

主权项

1.一种骨髓染色体G带的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)进行骨髓白细胞计数，根据白细胞计数结果确定骨髓血的接种量和培养时间；

(2)将骨髓血接种到骨髓细胞培养基中进行培养；

(3)向骨髓细胞培养基中加入秋水仙素，终止培养；

(4)收取骨髓细胞培养物，将其配制成细胞悬液，调节细胞悬液的浊度为2‑3个麦氏浊度；

(5)将细胞悬液滴于玻片上，然后将玻片过火，过火时间为10‑15s，过火后再进行烘烤；

(6)将烘烤后的玻片采用胰蛋白酶进行处理，然后采用姬姆萨染料染色，即获得具有G显带的染色体标本。

2.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤(1)中，骨髓白细胞的计数方法为：用白细胞稀释液先破坏红细胞，然后用血细胞计数板进行计数四角大方格，得出平均数N。

3.根据权利要求2所述的制作方法，其特征在于，步骤(1)中，骨髓血接种量的确定方法为：

当N≤20，每5ml骨髓细胞培养基内骨髓血的接种量为2.5ml；

当20＜N≤200，每5ml骨髓细胞培养基内骨髓血的接种量为50/N ml；

当N＞200，将骨髓血稀释至N’＝80‑120，再按每5ml骨髓细胞培养基内骨髓血的接种量为50/N’ml进行接种。

4.根据权利要求2所述的制作方法，其特征在于，步骤(1)中，培养时间的确定方法为：

当N≤40时，培养3天；

当N＞40时，培养2天。

5.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤(2)中，所述骨髓细胞培养基为RPMI‑1640培养基。

6.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤(2)中，培养温度为37℃。

7.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤(3)中，每5ml骨髓细胞培养基中加入0.1ml 20μg/ml的秋水仙素。

8.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤(4)中，收取骨髓细胞培养物的方法为：将终止培养后的骨髓细胞培养液离心，弃去上清液；加入预温至37℃的低渗液，混匀，37℃，35‑45min；加入固定液，混匀，离心，进行预固定；离心后弃去上清液，再加入固定液，‑20℃固定至少45min或4℃放置过夜，进行第一次固定；再次离心，弃去上清液，加入固定液，混匀，进行第二次固定；第二次固定后再离心，弃去上清液，即得到骨髓细胞培养物。

9.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤(5)中，将细胞悬液于5‑10cm高度处滴于玻片上。

10.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，步骤(6)中，胰蛋白酶的处理浓度为0.025％，处理时间为15‑25s。