[发明专利]一种心肌细胞分离提纯方法在审
| 申请号： | 201711340838.5 | 申请日： | 2017-12-14 |
| 公开（公告）号： | CN107881146A | 公开（公告）日： | 2018-04-06 |
| 发明（设计）人： | 董念国;刘保庆;李飞;尚小珂;史峰;邱雪峰;史嘉玮;陈思;吴龙;刘隽炜;刘义华;胡行健;洪昊;李华东;孙永丰;乔韡华;张超;王寅;李庚;朱鹏;刘名;代金池;白鹏;姜烨凡 | 申请（专利权）人： | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 武汉智权专利代理事务所(特殊普通合伙)42225 | 代理人： | 张凯 |
| 地址： | 430030 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种心肌细胞分离提纯方法，涉及生物细胞培养技术领域，S1，将配好的包被液加入于六孔板中孵育；S2，将心肌缓冲液加入培养皿中，取心脏置于装有心肌缓冲液的培养皿中漂洗；S3，剪下的心脏组织置于装有心肌缓冲液的离心管中；S4，将0.05％Ⅱ型胶原酶加入离心管中，摇床培养，弃上清；S5，将0.1％Ⅱ型胶原酶加入步骤S4处理后的离心管中，摇床培养，取上清放入装有血清的离心管中混匀；S6，上清混匀后过滤、离心，离心后用心肌缓冲液重悬，将细胞悬液加入离心管中；S7，将细胞悬液缓慢加入配好的密度梯度液中，进行离心；S8，将吸出的中间层置于离心管中，进行离心，离心后重悬，计数后加入步骤S1处理后的六孔板培养。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 心肌 细胞 分离 提纯 方法 | ||
【主权项】：
一种心肌细胞分离提纯方法，其特征在于，包括：S1，将配好的包被液加入于六孔板中，37℃孵育；S2，配制心肌缓冲液，将心肌缓冲液加入培养皿中，取心脏置于装有心肌缓冲液的培养皿中漂洗；S3，剪下的心脏组织置于装有心肌缓冲液的离心管中；S4，将0.05％Ⅱ型胶原酶加入装有心脏组织的离心管中，摇床培养，弃上清；S5，将0.1％Ⅱ型胶原酶加入步骤S4处理后的离心管中，摇床培养，取上清放入装有血清的离心管中混匀；S6，上清混匀后过滤、离心，离心后用心肌缓冲液重悬，将细胞悬液加入离心管中；S7，配制密度梯度液，将细胞悬液缓慢加入配好的密度梯度液中，进行离心；S8，离心后可见液面分层，先吸出最上层，再吸出中间层，将吸出的中间层置于离心管中，进行离心，离心后用10％不含青链霉素的胎牛血清溶液重悬，计数后将细胞接种于S1中漂洗好的六孔板中，置于37℃、5％CO2温箱中培养。
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