[发明专利]一种提高重组人凝血因子VIII高效表达的方法在审
| 申请号： | 201711346319.X | 申请日： | 2017-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN109929029A | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 肖海鹏;陈英;李利佳;胡育龙;龚庆伟;陈小锋;李文佳 | 申请（专利权）人： | 广东东阳光药业有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/755 | 分类号： | C07K14/755;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 523808 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程技术领域，具体是一种提高重组人凝血因子VIII(Recombinant Human Coagulation Factor VIII，简称“rhFVIII”)高效表达的方法，尤其涉及一种在哺乳动物细胞中提高基因重组人凝血因子VIII表达量的方法。本发明通过重组人凝血因子VIII基因序列的选择与设计、重组表达质粒和工程细胞的构建与筛选以及利用一定浓度的血清培养基培养阳性细胞，使重组人凝血因子VIII高效表达。该方法克服了现有细胞株构建困难、生产复杂、表达量较低等缺点，在降低研发成本的同时还具有快速、简便、稳定等特点，为重组人凝血因子VIII的工业化转移提供了简便方法，对于生物制品的开发以及治疗研究具有重要的研究与应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 重组人凝血因子 高效表达 表达量 构建 人凝血因子VIII 哺乳动物细胞 基因工程技术 重组表达质粒 血清培养基 工程细胞 基因序列 基因重组 阳性细胞 生物制品 细胞株 研发 筛选 研究 治疗 应用 开发 生产 | ||
【主权项】：
1.一种提高重组人凝血因子VIII高效表达的方法，包括以下步骤：(1)重组基因的构建，所述重组基因包含信号肽基因和rhFVIII基因；(2)将上述重组基因片段插入质粒中，得到重组质粒；(3)将上述重组质粒进行PvuI线性化，电转至哺乳动物细胞中，经鉴定与活性测定，筛选阳性细胞株；(4)将上述筛选得阳性细胞株接种至细胞培养基中，培养4‑5天，向细胞培养基中添加外源胎牛血清，收集培养液进行活性测定；其特征在于，所述胎牛血清的加入量为2‑6％。
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