[发明专利]一种脂肪氧合酶制备与纯化方法

摘要

本发明提供了一种脂肪氧合酶的制备与纯化方法，该制备方法包括以下步骤：（1）将大豆粉碎溶解，通过盐析法得到粗酶提取物；（2）阴离子交换层析：采用阴离子交换层析，利用分段洗脱的方法对粗提物进行初步纯化；（3）亲和柱层析：采用亲和柱层析进一步分离与纯化得到较纯的脂肪氧合酶。本方法的优点是：方法工艺分离效果好，得到的酶活性高，回收率高，生产成本低，可工业化生产。

主权项

1.一种脂肪氧合酶的制备与纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：粗提取：将大豆利用机械粉碎至120目,然后按料液比1:3‑1:10加入磷酸盐缓冲液（pH=7.0）混合搅拌，离心，取上清液加入固体硫酸铵使其浓度为30%‑50%并加入氨水调节pH 6.0‑8.0，搅拌，静置，离心，弃去上清，将沉淀物用蒸馏水溶解得粗酶提取液；初步纯化：阴离子交换层析柱用平衡缓冲液平衡1‑3h，流速为1‑8mL/min，将粗提液缓慢上样，分别用含0.1mol/L NaCl、0.5mol/L NaCl的洗脱缓冲液以1‑8mL/min的流速分段洗脱，收集并合并洗脱液；再纯化：将经阴离子交换层析纯化后合并的样品上样到亲和层析柱上，并用洗脱液以5‑10mL/min的流速进行洗脱，收集洗脱液；冷冻真空干燥：将上述产品进行冷冻真空干燥，得到干燥后的酶产品。