[发明专利]基于BGISEQ-500的微量血小板RNA测序检测试剂盒在审
| 申请号： | 201711366571.7 | 申请日： | 2017-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN109930206A | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 陈小芳;谢颖;周清;易吉;李南南;罗慧娟;于竞;朱师达 | 申请（专利权）人： | 深圳华大生命科学研究院 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;白艳 |
| 地址： | 518083 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了基于BGISEQ‑500的微量血小板RNA测序检测试剂盒。本发明提供了一种基于BGISEQ‑500的血小板RNA测序文库构建方法，包括如下步骤：1)提取待测样本的血小板RNA，反转录得到dscDNA；2)用包埋接头的Tn5转座酶片段化所述dscDNA，得到片段化产物；3)对所述片段化产物进行PCR扩增，得到扩增产物；4)环化所述扩增产物，得到血小板RNA测序文库。实验证明，本发明采用低于1ml的全血，进行微量血小板mRNA文库构建,通过自主搭建的血小板分析流程，进行高灵敏性和高特异性的肿瘤早期筛查。 | ||
| 搜索关键词： | 血小板 片段化产物 测序文库 检测试剂 扩增产物 构建 血小板分析 待测样本 早期筛查 反转录 灵敏性 片段化 包埋 环化 全血 肿瘤 | ||
【主权项】：
1.一种基于BGISEQ‑500的血小板RNA测序文库构建方法，包括如下步骤：1)提取待测样本的血小板RNA，反转录得到dscDNA；2)用包埋接头的Tn5转座酶片段化所述dscDNA，得到片段化产物；所述包埋接头的Tn5转座酶中的接头为接头1和接头2；所述接头1由引物A和引物B退火得到；所述接头2由引物A和引物C退火得到；所述引物A的核苷酸序列为序列1；所述引物B的核苷酸序列为序列2；所述引物C的核苷酸序列为序列3；3)对所述片段化产物进行PCR扩增，得到扩增产物；所述PCR扩增的引物为引物F、引物R、Tn5‑zebra F和Tn5‑zebra R；所述引物F的核苷酸序列为序列4；所述引物R的核苷酸序列为序列5；所述Tn5‑zebra F的核苷酸序列为序列6；所述Tn5‑zebra R由序列甲、barcode序列和序列乙组成；所述序列甲的核苷酸序列为序列7，所述序列乙的核苷酸序列为序列8；4)环化所述扩增产物，得到血小板RNA测序文库。
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