[发明专利]人溶菌酶基因的合成及其表达产物的构建方法

摘要

本发明提供了一种人溶菌酶基因的合成及其表达产物的构建方法。所述人溶菌酶基因根据hLZ原基因序列和hLZ氨基酸序列，在不改变其氨基酸序列的前提下，将毕赤酵母稀有密码子优化成毕赤酵母常用密码子。通过优化人溶菌酶基因片段的密码子，使其在真核表达时能够得到产量高、纯度高的人溶菌酶重组蛋白。 1

主权项

1.一种人溶菌酶基因针对毕赤酵母优化表达的序列，如SEQ ID No.1所示。

2.构建表达人溶菌酶重组菌的方法，包括以下步骤：

1)按权利要求1所述序列合成人溶菌酶基因片段，其两端分别加入酶切位点Xho I和Not I；

2)步骤1的基因片段通过双酶切插入质粒pPICZαA中，构建表达载体pPICZαA‑hLZ；

3)将表达载体pPICZαA‑hLZ通过电转化至毕赤酵母X‑33。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤2和3之间还包括步骤：2’)利用大肠杆菌Top10进行表达载体pPICZαA‑hLZ的单克隆扩增。

4.一种制备人溶菌酶的方法，其特征在于，使用根据权利要求2或3所述的构建方法获得的表达人溶菌酶重组菌，以甲醇诱导表达，通过亲和层析树脂纯化获得人溶菌酶；所述表达步骤和纯化步骤包括：扩大培养含人溶菌酶重组菌4L，收集培养基进行下游纯化，取诱导96h后的培养液离心，上清液用0.22um膜过滤，在4℃环境下透析16h，缓冲液50mM Tris，150mM NaCl，pH 8.0，透析结束后用Ni‑IDA树脂纯化。