[发明专利]用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒、检测方法及应用

摘要

本发明涉及微生物耐药性技术领域，具体公开一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒、检测方法及应用。本发明通过设计与喹诺酮抗性相关的emr耐药通路和mdt耐药通路的16个基因的引物，并且以16S rDNA为内参基因，使用高通量荧光定量PCR仪进行扩增，并且通过数据处理，细菌的氟喹诺酮相关基因的相对表达量和细菌之间的差异表达倍数可以直观地反应出来，相较于药敏试验的粗略判定耐药性。该方法更加科学和严谨。

主权项

1.一种用于大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒用于高通量荧光定量PCR检测大肠杆菌氟喹诺酮类抗生素耐药性，包括以16S rDNA为内参基因的emrB、emrA、emrE、emrK、emrR、emrY、mdtK、mdtA、mdtE、mdtG、mdtH、mdtD、mdtM、mdtN、mdtO、mdtP基因的引物，所述引物的序列如下所示：16S的上游引物：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；16S的下游引物：GGTTACCTTGTTACGACTT；emrB的上游引物：CTTTTCTCTAACCGTACATTATCTACGATAAA；emrB的下游引物：AGAACGTAGCGACTGATAAAATGCT；emrA的上游引物：CTGCTCCTCCTTCTCACCTTG；emrA的下游引物：TTATCGGCCCAGACTTTCGT；emrE的上游引物：ATCTTGGTGGTGCAATACTTG；emrE的下游引物：GGACAATACCGACTCCTGAC；emrK的上游引物：ATGCCACTATCGCACTCAA；emrK的下游引物：TGGTATGCTCCAGCGTTTC；emrR的上游引物：TTTACCGCCGCAGCATAAC；emrR的下游引物：ACACCGCCCTGTTCCATCT；emrY的上游引物：TTAGTGCTCGGTGTTGGTG；emrY的下游引物：GAGTAACTGCGGCATAAGG；mdtK的上游引物：ACACCAGATTGCCCTGAACTT；mdtK的下游引物：TTGCCATACAGACACCCACC；mdtA的上游引物：CCTAACGGGCGTGACTTCA；mdtA的下游引物：TTCACCTGTTTCAAGGGTCAAA；mdtE的上游引物：CGTCGGCGCACTCGTT；mdtE的下游引物：TCCAGACGTTGTACGGTAACCA；mdtG的上游引物：TGGCACAAAATATCTGGCAGTT；mdtG的下游引物：TTGTGTGGCGATAAGAGCATTAG；mdtH的上游引物：CTGCCGTTAAATGGATGTATGC；mdtH的下游引物：ACTCCAGCGGGCGATAGG；mdtD的上游引物：GTCTGAAACTGTTCCGCACTC；mdtD的下游引物：ACCAAAGCGATTCACTACCTG；mdtM的上游引物：GAGGCGTTCGGACAGACAA；mdtM的下游引物：CCAACAGTAAGCCAACAAATGA；mdtN的上游引物：CTCTGTTAGTGGTTGCGTTGG；mdtN的下游引物：ACTGCCTGGTTGTCGGTGA；mdtO的上游引物：CTGGGATGCCACCTGGAACT；mdtO的下游引物：TGAGGAGAACGGCTGAGTGC；mdtP的上游引物：CGAAACTGCGGGAAGAAA；mdtP的下游引物：GCAAACAAACCTACTGTGGC。