[发明专利]一种胰蛋白酶的提取方法及含有胰蛋白酶的原料药

摘要

本发明公开了一种胰蛋白酶的提取方法及含有胰蛋白酶的原料药，解决了由于杂蛋白过多，胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶很难分开，导致胰蛋白酶提取的纯度一直不高的问题，其技术方案要点包括有如下步骤：将动物胰脏切块搅碎加入到提取罐中提取；离心分层，压滤得到胰脏提取液；超滤浓缩后，加入（NH4）2SO4梯度盐析，得到胰酶混合物；加入胰蛋白酶晶体进行激活，得到胰酶粗提液；活化Sepharose 4B并与鸡卵粘蛋白偶联，将Sepharose 4B‑鸡卵粘蛋白混合物装柱，并通过Tris‑HCl缓冲液平衡；用0.1mol/L甲酸‑0.5mol/L KCl溶液洗脱，收集位于洗脱峰的流出液，得到胰蛋白酶精提液；将胰蛋白酶精提液脱盐过滤后，冻干成粉，即得到胰蛋白酶干粉制剂，能够得到高纯度的胰蛋白酶产品。

主权项

1.一种胰蛋白酶的提取方法，其特征在于，包括有如下步骤：步骤一：将动物胰脏预处理去除结缔组织和脂肪，切块搅碎，得到胰糜；步骤二：将胰糜加入到提取罐中加乙酸酸化水至浸没胰糜，搅拌混合后，得到胰糜-水混合物；步骤三：将胰糜-水混合物离心至分层，并对沉淀进行压滤，将压滤得到的清液与离心得到的上清液混合后得到胰脏提取液；步骤四：对胰脏提取液进行超滤浓缩后，加入（NH4）2SO4梯度盐析，得到胰酶混合物；步骤五：将胰酶混合物经过压滤后取滤饼，均匀向滤饼中加入0.1mol/L CaCl2溶液至滤饼完全溶解，加入胰蛋白酶晶体进行激活，得到胰酶粗提液；步骤六：将胰酶粗提液压滤后取上清液再次超滤浓缩，得到胰酶浓缩液；步骤七：活化Sepharose 4B并与鸡卵粘蛋白偶联，将Sepharose 4B-鸡卵粘蛋白混合物装柱，并通过Tris-HCl缓冲液平衡；步骤八：将胰酶浓缩液过柱去除杂蛋白，用0.1mol/L甲酸-0.5mol/L KCl溶液洗脱，收集位于洗脱峰的流出液，得到胰蛋白酶精提液；步骤九：将胰蛋白酶精提液脱盐过滤后，冻干成粉，即得到胰蛋白酶干粉制剂。