[发明专利]一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒及染色方法

摘要

本发明提供一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒及其染色方法，属于蛋白质分析检测技术领域，试剂盒包括HSC染料一系列试剂、HSC染料二系列试剂和水；所述的HSC染料一系列试剂包括无水乙醇和磷酸；所述的HSC染料二系列试剂包括考马斯亮蓝G‑250、硫酸铵、磷酸、甲醇、硫酸铝，通过HSC染料一固定后再使用HSC染料二染色。本发明提供的试剂盒和方法具有实验时间短、检测灵敏度较高和质谱兼容性好等的优点。

主权项

1.一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒，其特征在于，其包括HSC染料一系列试剂、HSC染料二系列试剂和水；所述的HSC染料一系列试剂包括无水乙醇和磷酸；所述的HSC染料二系列试剂包括考马斯亮蓝G‑250、硫酸铵、磷酸、甲醇、硫酸铝。

2.根据权利要求1所述的一种蛋白质PAGE凝胶电泳快速染色试剂盒，其特征在于，所述的水是超纯水。

3.一种使用权利要求1‑2任一所述试剂盒的快速染色方法，其特征在于，其包括以下步骤：

步骤S10制作HSC染料一，按体积比20‑30:2‑6分别量取无水乙醇和磷酸混合均匀，使用去离子水定容至无水乙醇终浓度为40‑60％，保存于棕色瓶中备用；

步骤S20制作HSC染料二，按质量比，硫酸铝：硫酸铵＝0.5‑1.5：1‑4称取硫酸铝和硫酸铵，混合；按1‑2g/ml的用量分别量取磷酸和超纯水并加入到酸铝和硫酸铵混合物中，加热搅拌1.5h至完全溶解；再按4‑8mg/ml加入考马斯亮蓝G‑250和按体积比，混合物：超纯水＝0.5‑1.5:1‑4加入超纯水，常温搅拌30min；搅拌结束后按体积比，混合物：甲醇＝2‑4：0.5‑2加入甲醇，密封搅拌10min，加入超纯水按体积比3‑5:4‑6对混合物定容并保存于棕色瓶中备用；

步骤S30显色反应：从电泳池取出凝胶，浸入超纯水中，轻摇清洗，将水倒干，再将凝胶浸入步骤S10制成的HSC染料一中，轻摇20‑40min，倒出HSC染料一，再将凝胶浸入步骤S20制成的HSC染料二中，快速摇动20‑40min，观察染色情况。

4.根据权利要求3所述的快速染色方法，其特征在于，其包括以下步骤：

步骤S10制作HSC染料一，按体积比25:4分别量取无水乙醇和磷酸混合均匀，使用去离子水定容至无水乙醇终浓度为50％，保存于棕色瓶中备用；

步骤S20制作HSC染料二，按质量比，硫酸铝：硫酸铵＝1：2称取硫酸铝和硫酸铵，混合；按1.5g/ml的用量分别量取磷酸和超纯水并加入到酸铝和硫酸铵混合物中，加热搅拌1.5h至完全溶解；再按6mg/ml加入考马斯亮蓝G‑250和按体积比，混合物：超纯水＝1:2加入超纯水，常温搅拌30min；搅拌结束后按体积比，混合物：甲醇＝3：1加入甲醇，密封搅拌10min，加入超纯水按体积比4:5对混合物定容并保存于棕色瓶中备用；

步骤S30显色反应：从电泳池取出凝胶，浸入超纯水中，轻摇清洗，将水倒干，再将凝胶浸入步骤S10制成的HSC染料一中，轻摇30min，倒出HSC染料一，再将凝胶浸入步骤S20制成的HSC染料二中，快速摇动30min，观察染色情况。

5.根据权利要求3或4所述的快速染色方法，其特征在于，所述的步骤S20中的加热搅拌的搅拌速度为350‑450r/min，加热温度为30‑50℃。

6.根据权利要求3或4所述的快速染色方法，其特征在于，所述的步骤S20中的常温搅拌的搅拌速度为550‑650r/min。

7.根据权利要求3或4所述的快速染色方法，其特征在于，所述的步骤S20中密封搅拌是采用parafilm膜密封。