[发明专利]一种葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的高密度发酵方法

摘要

本发明涉及微生物发酵技术领域，公开了一种葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的高密度发酵方法，该方法以保藏编号为CGMCC No.11626的毕赤酵母基因工程菌为出发菌株，采用体积比为20:1的甲醇和山梨醇进行诱导发酵，能够进一步提高GOD产量，下罐酶活达到905U/mL。

主权项

一种葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的高密度发酵方法，以葡萄糖氧化酶基因GOD转化的毕赤酵母基因工程菌为出发菌株，其保藏编号为CGMCCNo.11626，包括如下步骤：用质量浓度为28％的氨水调节发酵培养基的pH值为4.5～5.0，将活化的菌种扩培液接入所述发酵培养基中，在28～30℃下通气搅拌18～24h进行发酵处理；在所述发酵处理的过程中，当碳源消耗完溶氧量迅速上升时，流加补料培养基直至发酵液的OD600值为150～200；当碳源消耗完，发酵液的溶氧量再度升高至40％以上时，开始流加诱导培养基进行诱导发酵；所述诱导培养基含有体积比为20:1的甲醇和山梨醇，每升所述甲醇中还含有12～14mL的PTM1；所述诱导发酵的条件为：发酵温度为28℃，发酵液pH值为6.5，维持整个诱导过程中甲醇的终浓度在0.3％，溶氧量始终为0；在所述诱导发酵的过程中每隔24h加维生素C，使发酵液中维生素C的终浓度为70～90μg/L，在诱导72h时一次性加入维生素B2，使发酵液中微生素B2的终浓度为0.8～1.2mM。