[发明专利]一种干细胞冻存与复苏方法

摘要

本发明公开了一种干细胞冻存与复苏方法，包括如下步骤：细胞冻存液配制、容器消毒、干细胞检测、干细胞处理、干细胞筛选处理、冻存、干细胞复苏；本发明提出的方法通过对造血干细胞进行温度梯度冻存与复苏，防止造血干细胞因温度骤降而受到损伤，从而避免了因温度骤降使细胞内外水形成冰晶和细胞变形对细胞造成损害，该方法能够提高造血干细胞的冻存活性，减少造血干细胞的损失。

主权项

1.一种干细胞冻存与复苏方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、细胞冻存液配制：以质量百分含量计，30～40％人血白蛋白，二甲基亚砜5～15％，羟乙基淀粉占3～6％，余量为无血清培养基，配好的冷存液放在1～8℃的温度条件下低温冷藏；S2、容器消毒：用消毒液对存放干细胞的容器表面进行消毒，并通过紫外线进行全面照射，照射时长5～10分钟；S3、干细胞检测：对干细胞进行病毒检测，保证干细胞安全可靠；S4、干细胞处理：将干细胞分成分装在经S2消毒后的不同容器内，并将盛有干细胞的容器放置在1～10℃的无菌环境内存放30～50分钟；S5、干细胞筛选处理：将S4处理后的干细胞进行离心处理，去除上清液，然后通过显微镜观察干细胞活跃性，挑选出活跃性最强的一组；S6、冻存：将S5挑选出的干细胞在0～10℃的低温环境下，将干细胞和冻存液加入新的容器中，然后将冻存容器放入程序降温装置，先在2～8℃的温度条件下低温冷藏1～2小时，再在-10～-40℃的温度条件下冷冻12～24小时，再在-40～-80℃的温度条件下冷冻12～24小时，然后将冻存容器放置在液氮中冷冻；S7、干细胞复苏：将S6中干细胞从液氮中取出，将取出的冻存容器放置在5～15℃无菌环境下解冻3～5小时，然后再浸入在温度为37℃的无菌温水环境中进行解冻2～4小时，并进行匀速摇摆晃动使其融化复苏。