[发明专利]一种临床用脐血单核细胞的制备方法

摘要

本发明公开了一种脐带血单核细胞的制备方法：步骤一、脐带血初步筛选与保存；步骤二、培育；步骤三、吸取；步骤四、收集；步骤五、细胞培养；步骤六、单核细胞冻存和检测；步骤七；单核细胞的使用。本发明拟从原料采集开始直至细胞制备完成的全过程进行统一、系统监控，以实现脐带血单核细胞分离、冷冻的标准产品。

主权项

1.一种脐带血单核细胞的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：步骤1：脐带血初步筛选与保存：将分离、经过初步筛选的脐带血置于4～7℃下保存；步骤2：培育：将脐带血样本置于含有RPMI‑1640培养基的培养皿中，于37℃，2～8％CO2的细胞培养箱中孵育2h；步骤3：吸取：待单核细胞贴壁后，吸弃上层悬浮细胞，PBS缓冲液轻洗涤2次，加入少量RPMI‑1640培养基，用细胞刮刀刮下贴壁细胞；步骤4：收集：将步骤3中收集到的贴壁细胞离心，去上清液，得单核细胞；步骤5：细胞培养：取步骤4中收集到的单核细胞到培养基进行培养，调整细胞密度至1.1×108/T75瓶；步骤6：单核细胞冻存和检测：收集细胞并计数和活率，按4×107/ml/管进行冷冻保存；并将细胞上清进行无菌检测、支原体检测，取3×106细胞做细胞表面标志检测；步骤7：单核细胞的使用：取冷冻细胞，复苏后红细胞会全部破碎，用生理盐水洗涤，统计细胞数和细胞活率，根据计数结果按临床需要将细胞和复方电解质溶液混匀待用；并留样进行内毒素和细菌检测。