[发明专利]一种KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法

摘要

本发明公开了一种KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法，该方法通过建立小鼠腹腔细粒棘球蚴早期感染模型以及原头蚴与巨噬细胞共培养体系，了解巨噬细胞M1/M2极化相关因子表达情况和转录因子KLF4水平，期望阐明细粒棘球蚴通过上调KLF4转录、抑制IκB水平进而诱导M2型巨噬细胞的极化。并在此基础上，沉默KLF4试图恢复M1巨噬细胞的活性，有效杀伤虫体。为棘球蚴病的防治和新技术开发提供实验依据和理论基础。

主权项

1.一种KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、通过体外实验探讨原头蚴对巨噬细胞极化的影响；建立细粒棘球绦虫原头蚴与RAW264.7细胞共培养体系，分别在12,36,48,84h收集细胞和培养上清液，qRT-PCR检测KLF4，M1(TNF-α、IL-6、MCP-1)，M2(Arg-1、Fizz-1、MR)巨噬细胞因子的表达；ELISA检测相关因子分泌的含量；步骤2、通过体内实验探讨细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的影响；采用腹腔接种法建立小鼠细粒棘球蚴感染模型，BALB/c小鼠随机分组，实验组：0.2mL/只(原头蚴浓度：10000个/mL)；对照组：PBS 0.2mL/只；分别于第1、5、10、15天处死小鼠，收集腹腔巨噬细胞及外周血；qRT-PCR检测KLF4，M1(TNF-α、IL-6、MCP-1、iNOS)，M2(IL-10、TGF-β、Arg-1、Fizz-1、MR)巨噬细胞因子的mRNA表达；Western Blot检测KLF4、iNOS、Arg-1及IκB的蛋白表达；ELISA检测血清M1(IL-6、MCP-1)，M2(Arg-1、MR)巨噬细胞因子的表达；步骤3、通过干扰KLF4的转录探讨其在巨噬细胞极化中的作用；建立原头蚴与腹腔巨噬细胞共培养体系，12、24、36、48h收集细胞，qRT-PCR检测KLF4，M1(IL-1β、IL-6、MCP-1)，M2(IL-10、TGF-β、Arg-1、Fizz-1、MR)巨噬细胞因子的mRNA表达；Western Blot检测KLF4、iNOS、Arg-1及IκB的蛋白表达；通过小干扰RNA沉默KLF4，原头蚴刺激腹腔巨噬细胞，48h收集细胞，重复上述实验。