[发明专利]一种蚯蚓中蚯蚓蛋白和蚓激酶的提取方法

摘要

本发明涉及到一种蚯蚓中蚯蚓蛋白和蚓激酶的提取方法，其特征在于利用色谱柱和超滤结合的方法，从蚯蚓中提取蚓激酶和蚯蚓蛋白。该方法运用射频技术实现蛋白提取无菌机制，并且控制酶活发生的适宜温度，安全卫生无污染，通过对蚯蚓蛋白的差异性控制实现蚯蚓蛋白的提取和分离，有利于蚯蚓蛋白和蚓激酶的批量生产。

主权项

1.一种蚯蚓中蚯蚓蛋白和蚓激酶的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取新鲜饱满活蚯蚓，水洗数次，尽最大可能使其内脏中的污物排出，然后捞出用滤纸尽量吸其多余水分；(2)加入4℃预冷的0.1mol/LpH7.8的磷酸缓冲液于匀浆器中匀浆5分钟，在4℃冰箱中静置4小时，后高速离心，弃去沉淀，得上清液；(3)取上清液加固体硫酸铵达35％饱和度，4000r/min，离心10min，收集上清液，再加入固体硫酸铵达70％饱和度，静置过夜，高速离心，收集沉淀，后用0.1mol/L磷酸缓冲液溶解此沉淀物，过滤得粗蛋白溶液；(4)将粗蛋白溶液加去离子水脱盐，浓缩至浓缩液呈中性(pH7.0)，浓缩度达到5％时进入真空冷冻干燥机干燥5‐20小时，即得蚯蚓蛋白冻干粉；(5)将蚯蚓蛋白冻干粉加入0.1mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解，两端过20000da‐40000da超滤膜，得截留液A和滤过液B；(6)将截留液A加去离子水脱盐，浓缩至浓缩液呈中性(pH7.0)，浓缩度达到5％时进入真空冷冻干燥机干燥5‐20小时，得到冻干蚓激酶；(7)将步骤(3)所得粗蛋白溶液加入蛋白酶酶解，采用射频辅助酶解，过6000da超滤膜，将滤过液加去离子水脱盐，浓缩至浓缩液呈中性(pH7.0)，浓缩度达到5％时进入真空冷冻干燥机干燥5‐20小时，得到6500da类泛素蚯蚓多肽。