[发明专利]构建细胞全转录本扩增产物的方法及其应用有效
| 申请号： | 201711475632.3 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109988825B | 公开（公告）日： | 2023-03-10 |
| 发明（设计）人： | 郭琦;王秀莉;董超;李长平;卢孟孟;宋廷瑞 | 申请（专利权）人： | 杭州莲和医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;G01N33/574;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 赵天月 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市滨*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： |
本发明提出了一种构建细胞全转录本扩增产物的方法。该方法包括：将细胞样品进行磁珠捕获处理，以便获得待处理细胞；以及将所述待处理细胞进行单细胞全转录本扩增，以便获得所述待处理细胞的全转录本扩增产物，其中，进行单细胞全转录本扩增之前，进一步包括将所述待处理细胞进行裂解处理，所述裂解处理是通过向所述待处理细胞中加入PBS和裂解液进行的，基于1～100个待处理细胞，所述PBS的用量为7微升，所述裂解液的用量为4微升，所述裂解液包括100mM Tris‑HCl、500mM KCl、25mM MgCl |
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| 搜索关键词： | 构建 细胞 转录 扩增 产物 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种构建细胞全转录本扩增产物的方法，其特征在于，包括：将细胞样品进行磁珠捕获处理，以便获得待处理细胞；以及将所述待处理细胞进行单细胞全转录本扩增，以便获得所述待处理细胞的全转录本扩增产物，其中，进行单细胞全转录本扩增之前，进一步包括将所述待处理细胞进行裂解处理，所述裂解处理是通过向所述待处理细胞中加入PBS和裂解液进行的，基于1～100个待处理细胞，所述PBS的用量为7微升，所述裂解液的用量为4微升，所述裂解液包括100mM Tris‑HCl、500mM KCl、25mM MgCl2、10％NP40、0.1M DTT、40U/μl的RNA酶抑制剂、0.5μM UP1引物、2.5mM dNTP以及无核酸酶水。
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