[发明专利]一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法有效
| 申请号： | 201711477805.5 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN108285906B | 公开（公告）日： | 2021-07-09 |
| 发明（设计）人： | 吴珍芳;张献伟;李国玲;杨化强;莫健新;钟翠丽;石俊松;贺晓燕;张健;李紫聪;蔡更元 | 申请（专利权）人： | 温氏食品集团股份有限公司;华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京商专永信知识产权代理事务所(普通合伙) 11400 | 代理人： | 高之波;李波 |
| 地址： | 527300 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法，包括以下步骤：S1、安全靶点筛选及靶点绑定gRNA切割效率验证；S2、构建同源臂供体质粒，并获得定点整合转基因细胞系；S3、外源DNA定点整合转基因猪的构建。本发明在供体质粒中引入gRNA靶点序列，利用细胞内转录gRNA诱导Cas9核酸酶切割靶基因同时，线性化供体质粒，大大简化试验步骤，节约人力，且有利于提高共转染效率。本发明定点整合所用载体较少，同源臂大小适中，更有利于获得转基因细胞系，将高效定点整合技术，高活力定点转基因细胞培育技术与体细胞克隆技术结合，有利于定点整合转基因动物高效制备，加快转基因动物新品种培育速度。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 定点 整合 dna 转基因 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、安全靶点筛选及靶点绑定gRNA切割效率验证；S2、构建同源臂供体质粒，并获得定点整合转基因细胞系；S3、外源DNA定点整合转基因猪的构建。
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