[发明专利]芥菜原生质体的提取方法及芥菜杂种原生质体的融合方法

摘要

本发明提供了一种芥菜原生质体的提取方法及芥菜杂种原生质体的融合方法。所述提取方法包括：使用酶解液将芥菜无菌苗的真叶酶解；所述酶解液由酶液与SCW液组成，所述酶液包括纤维素酶、果胶酶、甘露醇和CaCl2，pH为5.6；所述SCW液包括山梨醇、CaCl2和MES，所述SCW液的pH为5.8；向酶解产物中的上清液中加入W5溶液，离心取沉淀，向所述沉淀中加入含有MES的蔗糖溶液，离心取原生质体沉淀，再向其中加入W5溶液，离心取层析液，所述层析液即为含有所述芥菜原生质体的溶液。本发明克服了提取过程中原生质体量少、易破裂且提取效果不稳定的缺点，并且该方法融合效率比较高，原生质体仍能保持较高的细胞活性。

主权项

1.一种芥菜原生质体的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：1)使用酶解液将芥菜无菌苗的真叶酶解，得到芥菜粗原生质体液；所述酶解液由体积比为3:(5‑10)的酶液与SCW液组成，所述酶液包括0.3％‑1.0％纤维素酶、0.05％‑0.2％果胶酶、0.1M‑0.5M甘露醇和70mM‑80mM CaCl2；所述SCW液包括0.3M‑0.8M山梨醇、8mM‑15mM CaCl2和2mM‑10mM MES；2)向步骤1)的芥菜粗原生质体液中加入W5溶液，离心后向沉淀中加入含有MES的蔗糖溶液，离心后再向沉淀中加入W5溶液，离心取层析液，所述层析液即为含有所述芥菜原生质体的溶液。