[发明专利]一种共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法

摘要

本发明涉及一种共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，属于大分子检测领域。本发明利用一定条件下，加入一定量低浓度的胶体保护剂使体系更稳定，且在一定浓度范围内，共振瑞利散射光谱增强值与壳聚糖的浓度成正比，以此作为壳聚糖的定量基础，建立了测定壳聚糖的共振瑞利散射法。通过实验证明，该方法操作简单、稳定性好，试剂廉价，灵敏度高和重现性好等优点，适合壳聚糖原料及复方样品中壳聚糖含量的测定。

主权项

1.一种共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，其包括下述步骤：1)绘制ΔI和不同浓度的壳聚糖的标准曲线：向10mL比色管中加入1.0mL一定浓度梯度的壳聚糖标准溶液，2.0mL甘氨酸‑盐酸缓冲溶液，1.0mL浓度为1×10‑4mol/L苯胺蓝溶液，再加入一定量的胶体保护剂，使用蒸馏水定容后充分摇匀，100℃水浴加热10min，冷却至室温，取1ml混合溶液加入石英比色皿，于F‑2500型荧光分光光度计上，以λex＝λem进行同步扫描，分别记录含壳聚糖的各检测体系在最大共振瑞利散射波长λ＝349nm处体系的共振散射强度值I，其中试剂空白在λ＝349nm处体系的共振散射强度值I0，并计算ΔI＝I‑I0，建立ΔI与壳聚糖浓度的标准曲线C；2)10μg/mL的样品工作液的制备：将壳聚糖胶囊去胶囊壳，称取0.04g于100mL容量瓶中，用0.5mol/L冰醋酸溶解，定容得样品储备液；用漏斗脱脂棉过滤储备液，滤液经6000r/min，离心机离心20min，取上清液2.5mL于100mL容量瓶，定容，得浓度为10μg/mL的样品工作液；3)样品中壳聚糖含量确定：取样品工作液1mL，按步骤1)检测方法进行测定，在λ＝349nm处分别测定含壳聚糖溶液的共振瑞利散射强度I和空白试剂的共振瑞利散射强度I0，并计算ΔI＝I‑I0，将ΔI代入线性回归方程求得样品中壳聚糖的含量。