[发明专利]利用双光子激发荧光的生物亲和性测定方法

摘要

本发明涉及用于定性和/或定量测定生物流体或悬浮液的样品中的分析物(4)的无分离的生物分析测定方法。本发明在于除了现有技术中公知的基于双光子激发的测定方法的基本步骤之外，该方法还包括其它步骤：a)记录设备的多个微粒(1)的聚焦位置和相应的双光子激发的荧光发射光子计数；b)采用记录的聚焦位置和相应的双光子激发的荧光发射光子计数来计算设备的校正矩阵，和c)采用校正矩阵校正来自所述设备的微粒(1)的双光子激发的荧光发射光子计数，所述校正矩阵采用记录的聚焦位置和相应的双光子激发的荧光发射计数对于设备获得。

主权项

1.一种用于定性和/或定量测定生物流体或悬浮液的样品中的分析物(4)的无分离的生物分析测定方法，所述方法包括以下步骤：a) 使包含对所述分析物(4)生物特异性的第一试剂(2)所结合的微粒(1)的生物亲和性固相与所述样品和对用荧光标记物标记的所述分析物(4)生物特异性的第二试剂(3)在反应体积中同时接触，从而引发反应，b) 使用光束偏转扫描仪和由光学移动微粒(1)的聚焦激光束产生的双光子激发体积扫描所述反应体积内的双光子激发焦点体积，c) 当所述双光子激发体积接近随机位于反应体积中的微粒(1)时，暂时中断所述双光子激发焦点体积的扫描或降低所述双光子激发焦点体积的扫描速度，d) 对所述微粒(1)施加光学力使得它移动到由所述激光束产生的双光子激发体积中并在其中移动，和e) 检测来自所述微粒(1)的双光子激发的荧光发射光子计数；其特征在于，所述方法还包括：f) 记录设备的多个所述微粒(1)的聚焦位置和相应的双光子激发的荧光发射光子计数；g) 通过采用所述记录的聚焦位置和所述相应的双光子激发的荧光发射光子计数来计算所述设备的校正矩阵，和h) 通过采用所述校正矩阵校正来自所述设备的所述微粒(1)的双光子激发的荧光发射光子计数，所述校正矩阵通过采用所述记录的聚焦位置和所述相应的双光子激发的荧光发射计数对于所述设备获得。