[发明专利]采用双探针邻近性连接系统的多重单分子RNA可视化

摘要

SNAIL提供了单细胞中的特定核酸的有成本效益的检测，并且可与流式细胞术组合以针对多个核酸同时分析大量细胞，例如，能够以高达约50、100、250、500或更多个细胞/秒的速率同时分析至少一种至高达5种、高达10种、高达15种、高达20种或更多种转录物。所述方法仅需要两种引物用于扩增，且可进一步包括检测引物。

主权项

1.一种用于测定单细胞中的靶核酸的丰度的方法，所述方法包括：使固定和透化过的细胞与至少一对SNAIL寡核苷酸引物在容许特异性杂交的条件下接触，其中所述引物对包含夹板引物寡核苷酸(SPO)和挂锁寡核苷酸(PO)，其中SPO和PO各自包含与所述靶核酸上的相邻序列互补的第一互补区(分别为CR1和CR1’)；且SPO和PO各自进一步包含位于邻近CR1或CR1'的第二互补区(CR2和CR2’)；其中CR2’是割裂区以使得PO的5’和3’端与CR2杂交，以便在杂交之后，PO的5’和3’端直接定位成彼此相邻；洗涤不含未结合的引物的细胞；使所述细胞与连接酶接触，其中连接所述PO以生成闭合环；使用所述PO作为模板和SPO作为聚合酶的引物来进行滚环扩增；使所述细胞与检测探针在容许特异性杂交的条件下接触；以及检测结合的检测探针的水平以测定所述靶核酸的丰度。