[发明专利]生物样品中磷酸化和非磷化形式的RKIP的定量评估方法

摘要

本发明涉及用于生物样品中RKIP蛋白和p‑RKIP蛋白的定量测量的方法。本发明提供了一种用于测量生物样品中磷酸化和非磷酸化形式的RKIP蛋白的定量方法。本发明还提供了一种新的ELISA测试，其特异于生物样品中非磷酸化(RKIP)和磷酸化形式(p‑RKIP)的RKIP定量配量，以获得每种形式的定量测量和它们之间的比例。在具有相同的性能下，本发明所提出的方法比现有的解决方案更方便和更有效。

主权项

1.用于生物样品中RKIP蛋白和p‑RKIP蛋白的定量测量的方法，其包括以下步骤：a)将下述a1)和a2)共同作用于两种不同的支持物：a1)识别存在于p‑RKIP蛋白中的第一氨基酸序列的抗体，和a2)识别存在于RKIP蛋白中的第一氨基酸序列的抗体；b)向所述两种支持物添加封闭溶液，c)添加所述生物样品；d)在各个支持物中添加：d1)识别存在于p‑RKIP蛋白中的第二氨基酸序列的抗体，和d2)识别存在于RKIP蛋白中的第二氨基酸序列的抗体；所述第一和第二氨基酸序列之一在RKIP和p‑RKIP之间是共同的，而另一个是含有磷酸化的丝氨酸153的序列，因此对于p‑RKIP和RKIP是不同的；e)添加当与识别所述第二氨基酸序列的所述抗体接触时，能够确定与结合所述第二氨基酸序列的所述抗体的量成比例的光学性质变化的标记物；f)测量两种样品的光学性质，并将其与通过测量两个系列的支持物的相同光学性质获得的校准曲线进行比较，在所述两个系列的支持物中已经顺序添加了：i)识别所述系列中第一个的存在于p‑RKIP蛋白中的所述第一氨基酸序列和所述系列中第二个的存在于RKIP蛋白中的所述第一氨基酸序列的抗体；ii)封闭溶液；iii)已知和增加量的重组杂合标准品，其包含所述系列中第一个的存在于p‑RKIP蛋白中的所述第一和第二氨基酸序列和所述系列中第二个的存在于RKIP蛋白中的所述第一和第二氨基酸序列；iv)分别特异性识别存在于p‑RKIP中的所述第二氨基酸序列或存在于RKIP中的所述第二序列的抗体；v)当与识别所述第二氨基酸序列的所述抗体接触时，能够确定与结合所述第二氨基酸序列的所述抗体的量成比例的光学性质变化的标记物。