[发明专利]全转录组扩增的方法有效
| 申请号： | 201780034548.X | 申请日： | 2017-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN109312331B | 公开（公告）日： | 2022-08-02 |
| 发明（设计）人： | C·宗 | 申请（专利权）人： | 贝勒医学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12P19/34;C12Q1/6806;C40B50/06;C40B50/08 |
| 代理公司： | 中国贸促会专利商标事务所有限公司 11038 | 代理人： | 刘晓东 |
| 地址： | 美国得*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本公开的实施方案包括用于总RNA单细胞测序的高度灵敏的定量方法。在特定情况下，方法利用多种引物与RNA的退火，对从其逆转录的单链DNA进行多核苷酸加尾，以及在引物中利用条形码以用于扩增由第二链合成产生的扩增子。 | ||
| 搜索关键词： | 转录 扩增 方法 | ||
【主权项】：
1.一种从一个或多个细胞扩增RNA的方法，其包括以下步骤：将来自所述一个或多个细胞的RNA暴露于第一多种引物和至少一种逆转录酶以产生反应混合物；使所述反应混合物经受允许所述引物与RNA退火和第一链cDNA合成以产生延伸的DNA链的条件；消化未退火的引物；使所述反应混合物中的酶失活；消化所述反应混合物中的RNA；对所述延长的DNA链的3'末端进行加尾；在合适的条件下使用第二多种引物和至少一种DNA聚合酶产生第二链cDNA合成，以产生双链全扩增子，其中所述第一多种引物、第二多种引物或两者中的引物包含下式：XnYmZp，其中n大于2且X富含40％‑60％的G或富含40％‑60％的C，其中Y为任何核苷酸且m为5‑8个核苷酸，并且，其中当X富含G时，Z为T和G，或当X富含C时，Z为C，其中p为2‑20个核苷酸。
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