[发明专利]酶促核酸合成在审
| 申请号： | 201780040789.5 | 申请日： | 2017-05-09 |
| 公开（公告）号： | CN109715824A | 公开（公告）日： | 2019-05-03 |
| 发明（设计）人： | R·卡尔霍;H·H·李;G·M·丘奇 | 申请（专利权）人： | 哈佛学院董事及会员团体 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;G01N27/00;G01N27/26 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 张静;陈文青 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本公开提供了使用电将反应区和反应位点的pH从失活pH(该pH下酶无活性)改变至活化pH(在该pH下酶具有活性)来活化酶(如易错或非模板依赖性聚合酶)以将核苷酸添加至起始物或生长的聚合物链的方法。然后可以将活化pH变回失活pH，并且可以如所需重复多次该过程以产生靶核酸序列。 | ||
| 搜索关键词： | 活化 失活 靶核酸序列 核苷酸添加 模板依赖性 反应位点 聚合物链 酶促核酸 反应区 活化酶 聚合酶 起始物 酶无 合成 生长 重复 | ||
【主权项】：
1.一种制备多核苷酸的方法，其包括：(a)将选定的三磷酸核苷酸、一种或多种阳离子和易错或非模板依赖性DNA聚合酶在水性电解质介质中于反应位点组合，所述反应位点包括与其连接的起始物并且具有3'末端核苷酸，其中所述反应位点处于失活pH，所述失活pH使所述易错或非模板依赖性DNA聚合酶不具有将所述选定的三磷酸核苷酸添加至所述起始物序列的活性，和其中所述反应位点在反应区内，所述反应区包括电化学电池的电极，其中所述电极是所述电化学电池的阳极或阴极；(b)向所述电化学电池施加电压，以在所述反应区处的所述水性电解质介质中产生酸或碱以改变所述反应区中的pH，从而产生活化pH以活化所述易错或非模板依赖性DNA聚合酶，其中反应试剂以选定的浓度存在并且处于将一个或多个所述选定的三磷酸核苷酸共价添加至3'末端核苷酸的条件下，从而使所述选定的三磷酸核苷酸成为3'末端核苷酸并且处于其中所需数量的所述选定的三磷酸核苷酸被添加至起始物序列的条件下，和(c)重复步骤(a)和(b)直到形成所述多核苷酸。
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