[发明专利]RNA检测试剂盒和方法

摘要

本发明涉及用于检测RNA分子，特别是小尺寸RNA分子如miRNA的试剂盒和方法。本发明提供了RNA检测试剂盒和方法，其中将用于逆转录的短引物用于逆转录过程，目的是使引物在逆转录反应溶液中迅速扩散并因此减少逆转录反应时间，使得能够提高整体PCR反应速率并且稳定和迅速地检测RNA。此外，本发明提供了RNA检测试剂盒和方法，其中在逆转录过程之后，通过使用远长于用于逆转录的引物之用于延伸的引物对单链cDNA进行延伸，因此可以获得足够长的模板以进行PCR扩增。

主权项

1.用于检测RNA分子的试剂盒，其包含：短逆转录引物，其由第一杂交寡核苷酸和第一衔接子寡核苷酸构成，所述第一杂交寡核苷酸由与所述RNA分子的poly(A)尾杂交的寡(dT)构成，并且所述第一衔接子寡核苷酸连接至所述第一杂交寡核苷酸的5’末端并且为不与所述RNA分子杂交的任何核酸序列；延伸引物，其比所述逆转录引物更长并且由第二杂交寡核苷酸和第二衔接子寡核苷酸构成，所述第二杂交寡核苷酸能够与从所述RNA分子逆转录的单链cDNA的3’末端部分特异性杂交，该3’末端部分为所述单链cDNA的除寡(dT)以外的部分，并且所述第二衔接子寡核苷酸连接至所述第二杂交寡核苷酸的5’末端并且具有不与所述单链cDNA杂交的任何核酸序列；以及正向引物，其具有在所述第二衔接子寡核苷酸序列内的序列。