[发明专利]真菌宿主细胞中DNA片段的基因组整合在审
| 申请号： | 201780049670.4 | 申请日： | 2017-09-13 |
| 公开（公告）号： | CN109563522A | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | D·M·K·克里特加德 | 申请（专利权）人： | 诺维信公司 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人： | 顾小曼;邹亮 |
| 地址： | 丹麦，*** | 国省代码： | 丹麦;DK |
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| 摘要： | 本发明涉及在真菌宿主细胞中的特定染色体靶位点处体内组装和整合目的多核苷酸的方法，所述方法包括用以下转化该宿主细胞：iv.至少一种多核苷酸片段，其依次包含上游侧翼区和该目的多核苷酸的5’部分；v.至少一种多核苷酸片段，其依次包含该目的多核苷酸的3’部分和下游侧翼区；和，任选地vi.一种或多种另外的多核苷酸片段，每种多核苷酸片段包含该目的多核苷酸的5’部分和3’部分；其中每种多核苷酸片段的5’部分和3’部分与另一片段的一个或多个5’部分和3’部分具有至少20bp的重叠，因此这些片段覆盖整个目的多核苷酸，并且其中这些侧翼区具有足够的大小和同源性以实现与该特定靶位点的同源重组，用于染色体整合。 | ||
| 搜索关键词： | 多核苷酸片段 多核苷酸 真菌宿主细胞 靶位点 基因组整合 染色体整合 上游侧翼区 下游侧翼区 宿主细胞 同源重组 侧翼区 染色体 整合 组装 体内 覆盖 转化 | ||
【主权项】：
1.一种用于在真菌宿主细胞中的特定染色体靶位点处体内组装和整合目的多核苷酸的方法，所述方法包括以下步骤：a)用以下转化该宿主细胞：iv.至少一种多核苷酸片段，其依次包含上游侧翼区和该目的多核苷酸的5’部分；v.至少一种多核苷酸片段，其依次包含该目的多核苷酸的3’部分和下游侧翼区；和，任选地vi.一种或多种另外的多核苷酸片段，每种多核苷酸片段包含该目的多核苷酸的5’部分和3’部分；其中每种多核苷酸片段的5’部分和3’部分与另一片段的一个或多个5’部分和3’部分具有至少20bp的重叠，因此这些片段覆盖整个目的多核苷酸，并且其中这些侧翼区具有足够的大小并且与该特定染色体靶位点具有足够的同源性以实现与该特定靶位点的同源重组；b)在有利于体内同源重组发生的条件下培养该转化的宿主细胞，其中重叠PCR片段重组以形成整个目的多核苷酸，并且这些侧翼区与该染色体重组以在该特定染色体靶位点处整合该目的多核苷酸；和c)选择经转化的宿主细胞，其中该目的多核苷酸被整合到该特定染色体靶位点中。
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