[发明专利]单核苷酸检测方法及相关的探针在审
| 申请号： | 201780056674.5 | 申请日： | 2017-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN109790566A | 公开（公告）日： | 2019-05-21 |
| 发明（设计）人： | 巴纳比·巴姆福思;卡梅伦·亚历山大·弗雷林 | 申请（专利权）人： | 贝斯4创新公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6818 | 分类号： | C12Q1/6818;C12Q1/6823;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 张国梁;张莹 |
| 地址： | 英国*** | 国省代码： | 英国;GB |
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| 摘要： | 提供了一种核酸测序的方法。所述方法的特征在于以下步骤：(1)通过逐步酶消化核酸生成单核苷三磷酸流；(2)通过在聚合酶和连接酶存在下，使至少一个单核苷三磷酸与相应的初级探针反应，产生至少一个基本上双链的初级寡核苷酸占用探针，所述初级探针包含(a)第一单链寡核苷酸，其包含第一限制性核酸内切酶切口位点、用于捕获所述单核苷三磷酸的单核苷酸捕获位点和并置于所述捕获位点任一侧的寡核苷酸侧翼区，和(b)能够与第一寡核苷酸侧翼区杂交的第二和第三单链寡核苷酸；(3)用第一切口限制性核酸内切酶在第一切口位点切割占用初级探针的第一寡核苷酸链，以产生分离的第一寡核苷酸组分；(4)将步骤(3)中产生的第一寡核苷酸组分与占用探针的互补链分离；(5)通过在连接酶存在下使至少一个分离的第一寡核苷酸组分与相应的二级探针反应产生至少一个基本上双链的二级占用探针，所述二级探针包含(c)包含第二限制性核酸内切酶切口位点并带有基本上不可检测状态的荧光团的互补第四寡核苷酸，和任选的(d)至少部分与第四寡核苷酸互补的单链第五寡核苷酸；(6)用第二切口限制性核酸内切酶切割占用二级探针的第四寡核苷酸链，以产生分离的第四寡核苷酸组分，其中至少一些具有可检测状态的荧光团和至少部分为第四寡核苷酸的互补序列的单链第六寡核苷酸；和(7)检测步骤(6)中释放的荧光团。 | ||
| 搜索关键词： | 寡核苷酸 探针 限制性核酸内切酶 位点 占用 单核苷 荧光团 磷酸 捕获 单链寡核苷酸 寡核苷酸链 单核苷酸 探针反应 侧翼区 连接酶 单链 双链 切割 可检测状态 不可检测 核酸测序 互补序列 互补链 聚合酶 酶消化 核酸 检测 杂交 释放 | ||
【主权项】：
1.一种核酸测序方法，其特征在于以下步骤：(1)通过逐步酶消化核酸生成单核苷三磷酸流；(2)通过在聚合酶和连接酶存在下，使至少一个单核苷三磷酸与相应的初级探针反应，产生至少一个基本上双链的初级寡核苷酸占用探针，所述初级探针包含(a)第一单链寡核苷酸，其包含第一限制性核酸内切酶切口位点、用于捕获所述单核苷三磷酸的单核苷酸捕获位点和并置于所述捕获位点任一侧的寡核苷酸侧翼区，和(b)能够与第一寡核苷酸侧翼区杂交的第二和第三单链寡核苷酸；(3)用第一切口限制性核酸内切酶在第一切口位点切割占用初级探针的第一寡核苷酸链，以产生分离的第一寡核苷酸组分；(4)将步骤(3)中产生的第一寡核苷酸组分与占用探针的互补链分离；(5)通过在连接酶存在下使至少一个分离的第一寡核苷酸组分与相应的二级探针反应产生至少一个基本上双链的二级占用探针，所述二级探针包含(c)包含第二限制性核酸内切酶切口位点并带有基本上不可检测状态的荧光团的互补第四寡核苷酸，和任选的(d)至少部分与第四寡核苷酸互补的单链第五寡核苷酸；(6)用第二切口限制性核酸内切酶切割占用二级探针的第四寡核苷酸链，以产生分离的第四寡核苷酸组分，其中至少一些具有可检测状态的荧光团和至少部分为第四寡核苷酸的互补序列的单链第六寡核苷酸；和(7)检测步骤(6)中释放的荧光团。
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