[发明专利]用于扩增核酸的方法和用于实施其的试剂盒

摘要

公开了一种扩增核酸的方法，其中基本上利用如下事实：在靶序列特异性激活物寡核苷酸的存在下可倍增/扩增预定义的核酸链(靶序列)。靶序列特异性激活物寡核苷酸通过链置换导致再生的互补引物延伸产物的分离，使得新的引物寡核苷酸可附接至相应的模板链。由此形成的引物寡核苷酸和模板链的复合物可引发新的引物延伸反应。由此形成的引物延伸产物又起模板的作用，从而产生指数扩增反应。这里，激活物寡核苷酸本身不起模板的作用，并且优选对引物延伸反应呈惰性。激活物寡核苷酸在反应中起辅助因子的作用，其再生反应所需模板的相关链区段的单链状态。通过使用包含至少一种引物寡核苷酸、至少一种聚合酶、一组聚合酶底物(例如dNTP)和至少一种特异性激活物寡核苷酸的一组组分，待扩增的核酸可被线性地扩增。通过使用此类组和第二引物寡核苷酸，可呈指数地扩增待扩增的核酸，其中得到的特异性引物延伸产物作为模板用于进一步的引物延伸反应。

主权项

1.用于扩增核酸的方法，包括以下步骤：a)将第一引物寡核苷酸与待扩增的核酸链的3'区段杂交，其中待扩增的核酸链包含靶序列，其中第一引物寡核苷酸包含：·第一引物寡核苷酸的3'区段中的第一引物区域，其可序列特异性结合待扩增的核酸链的链，·第二区域，其直接或经由接头连接到第一引物寡核苷酸的第一引物区域的5'末端并且包含适合于结合激活物寡核苷酸并支持通过激活物寡核苷酸的链置换(步骤c)的多核苷酸尾，其中多核苷酸尾在选定的反应条件下基本上保持未通过聚合酶复制，b)通过聚合酶延伸第一引物寡核苷酸以形成第一引物延伸产物，其包含与待扩增的核酸链(a)的靶序列互补的序列，c)将激活物寡核苷酸与第一延伸引物寡核苷酸的第二区域的多核苷酸尾结合，其中所述激活物寡核苷酸包含：·第一单链区域，其可与第一引物寡核苷酸的第二区域的多核苷酸尾结合，·第二单链区域，其基本上是互补的并且可与第一引物寡核苷酸的第一区域结合，·第三单链区域，其与第一引物延伸产物的已通过聚合酶合成的延伸产物的至少一区段基本上互补，其中激活物寡核苷酸不作为用于第一引物寡核苷酸的引物延伸的模板，d)通过置换与所述第一引物区域互补的待扩增的核酸链的链，将激活物寡核苷酸与第一延伸引物寡核苷酸的第一引物区域结合，e)通过置换与所述延伸产物互补的待扩增的核酸链的链，将激活物寡核苷酸与第一延伸引物寡核苷酸的延伸产物的互补区段结合，其中第一引物延伸产物的3'区段变成单链，f)将第二寡核苷酸引物与第一引物延伸产物杂交，其中第二寡核苷酸引物的3'区段包含可与第一引物延伸产物杂交的序列；和g)用聚合酶延伸第二寡核苷酸引物以形成第二引物延伸产物，其中延伸发生直至并包括第一引物寡核苷酸的第一引物区域，并且所述第一引物区域通过聚合酶复制，其中第二区域的多核苷酸尾保持未被复制，h)重复步骤a)‑g)直至达到所期望的扩增程度。