[发明专利]一种青花菜游离小孢子培养获得再生植株的方法

摘要

本发明公开了一种青花菜游离小孢子培养获得再生植株的方法，属于生物技术领域。包括取适度的花蕾，进行4℃低温预处理24h，消毒后采用挤压法使游离孢子，过滤并离心，将纯化的小孢子悬浮在的液体培养基中，32.5℃高温热激处理24h后转移到25℃黑暗培养15‑20天；出现肉眼可见的胚状体后，置于光照下培养5～7d至出现子叶型胚状体,待胚状体转绿后接到继代培养基上萌发然后转移到生根培养基上生根，获得完整的再生植株；然后开瓶炼苗，驯化移栽到装有灭菌基质的营养钵中；利用该方法进行培养，获得较高的频率的胚状体，所获得的单倍体再生植株既是良好的育种材料，也是进行分子标记和遗传图谱绘制研究、基因克隆和转基因等研究的理想材料。

主权项

1.一种青花菜游离小孢子培养获得再生植株的方法，其特征在于：包括，小孢子培养，将分离并清洗后的小孢子悬浮在盛有pH6.2的液体培养基的培养容器中，调整小孢子密度为1×105～2×105个〃mL‑1，并加入100μL 1％的活性炭混悬液，将所述加入活性炭混悬液的小孢子置于32.5℃恒温培养箱热激处理24h，再转移到25℃条件下静止黑暗培养15～20天；胚状体的萌发，将所述经过培养的小孢子至出现肉眼可见的胚状体后，将所述胚状体培养，待所述胚状体发育到子叶期时转置于光照下培养5～7d，待胚转绿后转到盛有继代培养基的培养容器上培养，经过3‑4次继代，将所得的无根试管苗转移到生根培养基中进行生根培养；植株再生，待所述经过生根培养后得到的再生株长到含4～5片叶的健壮苗时，在培养室内开瓶炼苗，经驯化移栽到装有灭菌基质的营养钵中，经过25℃，12h光照和12h黑暗的培养条件，1周后将营养钵放置于外界阴凉处，逐步炼苗，3周后将其移栽到大田，获得植株。