[发明专利]一种检测猪病毒性繁殖障碍性疾病的PCR体系及检测方法在审
| 申请号： | 201810018930.8 | 申请日： | 2018-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN107988436A | 公开（公告）日： | 2018-05-04 |
| 发明（设计）人： | 李文刚;刘胜利;李文鹏;吕玉金;吴凤笋;刘玲玲 | 申请（专利权）人： | 河南牧业经济学院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司11212 | 代理人： | 谈杰 |
| 地址： | 450046 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测猪病毒性繁殖障碍性疾病的PCR体系及检测方法，包括如下步骤提取病毒DNA和RNA，并将RNA进行反转录，同时进行CSFV、PPV、PRRSV、JEV特异性引物设计。然后，对设计的引物进行PCR反应条件的优化，从而确定最佳多重PCR模式。按照最佳多重PCR反应条件进行试验，验证多重PCR的特异性、敏感性以及稳定性，同时进行临床样品检测以验证此方法操作的可行性。此外，本发明还公布了用于同时检测CSFV、PPV、PRRSV、JEV的引物序列。本发明的四种猪病毒性繁殖障碍性疾病的多重PCR体系及检测方法，不仅保留了常规PCR的高特异性、敏感性，又减少了操作步骤，实现了一次扩增可同时检测多种微生物的目的，大大节省了时间，节约了经费开支。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 病毒性 繁殖 障碍 性疾病 pcr 体系 方法 | ||
【主权项】：
一种检测猪病毒性繁殖障碍性疾病的PCR体系及检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)PPV病毒DNA的提取；(2)CSFV、PRRSV、JEV病毒RNA的提取以及反转录；(3)特异性引物设计与筛选；(4)对步骤(3)所设计的特异性引物进行PCR反应条件优化；(5)按照步骤(4)建立的最佳多重PCR反应体系进行多重PCR扩增特异性验证；(6)按照步骤(4)建立的最佳多重PCR反应体系进行多重PCR敏感性验证；(7)按照步骤(4)建立的最佳多重PCR反应体系进行多重PCR稳定性验证；(8)按照建立的多重PCR方法对临床样品的检测。
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