[发明专利]用于快速繁殖过表达ANG-1的EPC的组合物

摘要

本发明公开了一种用于快速繁殖过表达ANG‑1的EPC的组合物，通过对人体外周血或骨髓中获取的单核细胞进行培养获得干细胞培养基制剂X，将该制剂添加到含有多种细胞培养因子的内皮细胞基础培养基中得到本发明的组合物。通过实验发现，干细胞培养基制剂X能够明缩短过表达ANG‑1的EPC的传代培养周期，并能有效提高表达ANG‑1的EPC的单代增殖倍数。将用本发明的组合物大量培养的过表达ANG‑1的EPC用于构建组织工程骨，有望解决骨组织工程研究中的血管化问题。

主权项

1.用于快速繁殖过表达ANG‑1的EPC的组合物，其特征在于，该组合物为包括以下成分的内皮细胞基础培养基：5‑120ng/mL的血管内皮生长因子、2‑120ng/mL的胰岛素样生长因子、0.5‑30ng/mL的表皮细胞生长因子、5‑100ng/mL成纤维细胞生长因子、0‑5μg/mL的坑坏血酸、0‑0.2g/mL的胎牛血清和5‑150ng/mL的干细胞培养基制剂X；内皮细胞基础培养基为DMEM培养基、DMEM+HG培养基、M199培养基、1640培养基、DMEM培养基、EGM‑2培养基、M200培养基或DMEM/F12培养基中的一种；干细胞培养基制剂X的制备方法如下：(1)从健康人血液中通过密度梯度离心的方法获取外周血单核细胞，或从骨髓中通过密度梯度离心的方法获取骨髓单核细胞；(2)采用包括以下成分的干细胞基础培养基对获得的单核细胞进行培养：20‑500ng/mL的干细胞因子、25‑600ng/mL的FMS样络氨酸激活酶‑3‑配体、2‑300ng/mL的血小板因子、1‑300ng/mL的白介素3、1‑40ng/mL的粒细胞集落剌激生物因子、0.2‑15ng/mL的Sall样蛋白4B；(3)培养3‑5天后分离细胞和培养基，获得无细胞培养基，对获得的无细胞培养基进行过滤细胞碎片、纯化、冻干处理获取干细胞培养基制剂X。