[发明专利]一种筛选三七根际生防菌微生物的方法

摘要

本发明涉及一种筛选多功能有益微生物的方法，属植物保护领域。该方法针对目前利用体外抑菌圈法筛选出的有益微生物在三七根际不能很好地发挥防治作用的缺点，提供从三七土壤中筛选既能利用三七根系分泌的皂苷作为营养进行生长又能有效拮抗根腐病菌的微生物的方法。它首先利用三七根系进行代谢物粗皂苷提取，再利用提取的粗皂苷制作选择性培养基，然后利用选择性培养基筛选以皂苷作为营养进行生长的微生物，最后利用对峙培养法筛选对根腐病菌具有拮抗能力的微生物。采用本发明方法筛选出来的微生物菌株，既可以在三七根际很好地定殖，又能有效拮抗根腐病菌，最终实现三七种植根腐病的生态防控。

主权项

1.一种筛选三七根际生防菌微生物的方法，具体包括如下步骤：(1)利用三七根系进行代谢物粗皂苷提取：将三七块根切成薄片，风干，磨成三七粉并过筛，称取三七粉100g，用甲醇超声提取，提取后离心分离，收集上清液，将上清液蒸发浓缩除去甲醇，然后冷冻干燥成粗皂苷，冷冻条件下保存备用；(2)利用粗皂苷制作选择性培养基：分别称取10g第(1)步制备的粗皂苷、3g NaNO3、1gKH2PO4、0.5g KCl、0.5g MgSO4·7H2O、0.01g FeSO4·7H2O和15～20g琼脂加入容器中溶解，混匀，调节pH值至7.0左右，进行灭菌处理，得到选择性培养基，将选择性培养基倒入灭菌培养皿中，冷却后待用；(3)利用选择性培养基筛选以皂苷为作为营养进行生长的微生物：采集三七根际土壤，除杂过筛，称取10g土壤加入装有无菌水的容器中于摇床上120～130rpm震荡20～30min，然后用无菌水进行10倍梯度系列稀释得到稀释液，吸取稀释液均匀涂布在第(2)步中装有选择性培养基的培养皿上，将涂匀的培养皿置于25～28℃下培养24h～72h，从中筛选出以皂苷作为营养进行生长的土壤微生物；(4)筛选对根腐病菌具有拮抗能力的微生物：在培养皿中心位置的培养基上接种待测根腐病菌菌饼，然后在所述待测根腐病菌菌饼上接种3～4个第(3)步筛选出的土壤微生物，于25～28℃下培养5～7d后观察是否出现抑菌圈，根据抑菌圈大小筛选出对根腐病菌具有拮抗能力的微生物。