[发明专利]生物反应器扩增流感病毒H1N1的优化工艺方法

摘要

本发明公开了一种生物反应器扩增流感病毒H1N1的优化工艺方法。该方法用聚纤维纸片（Fibra disk）载体和生物反应器系统扩增犬肾上皮细胞（MDCK）从而建立流感病毒复制扩增的整套工艺流程。本发明建立在对H1N1型流感病毒复制扩增体系全面适应的条件下，在细胞培养阶段用含10%的血清的DMEM培养基，在病毒接种吸附后至24小时使用带5%的血清DMEM培养基加0.5%的胰酶，在收获病毒阶段采用无血清培养基添加0.25%的水解乳蛋白和0.25%的胰酶，同时每24小时补充1.5g/L的葡萄糖，采用批式收获换液方法。该方法在优化工艺基础上使用组合培养基方案，能达到较高的病毒滴度，所建立的优化工艺是具有良好重复性、高效流感病毒H1N1扩增的工艺。

主权项

1.一种生物反应器扩增流感病毒H1N1的优化工艺方法，其特征在于,采用聚纤维纸片载体在生物反应器内扩增犬肾上皮细胞（MDCK），然后进行流感病毒复制扩增，具体如下：在生物反应器内加入生长液，所述的生长液为含10%的胎牛血清的DMEM培养基，接种MDCK细胞，批次换液培养7天，密度达到6.0×106个/ml以上，培养细胞7天后换液成无血清培养基加0.5%的胰酶，接种流感病毒H1N1，35℃静止吸附病毒3小时，加入5%胎牛血清，继续培养21小时，弃去全部培养液，并用PBS冲洗一遍去除血清，全部换成无血清DMEM培养基加0.25%水解乳蛋白和0.25%的胰酶，静止再吸附2小时以利于病毒再感染正常细胞，同时每24小时补充2g/L的葡萄糖；连续培养扩增病毒，每24小时批次换液，分别收获48、72、96、120小时上清；120小时后，细胞每日葡萄糖消耗低于1g/L，用低渗缓冲液破细胞，反复冲洗三次，收获细胞内病毒。