[发明专利]一种基于酶纳米反应器的内分泌干扰物电化学检测法

摘要

本发明涉及了一种基于酶纳米反应器的内分泌干扰物电化学检测法。本发明利用功能化的二氧化硅作为模板，通过疏水性‑疏水性作用将氧化石墨烯与之混合，冷冻，煅烧得到石墨烯泡沫，同时利用静电吸附和共价键法将活性酶固定在石墨烯泡沫(NGF)孔从而构建CYP3A4/PNGF酶反应器。发展出一种具有成本低、操作简单、方便快捷的特点的电化学分析法。本发明使用的酶反应器可调控孔径，通过安培法可以快速、准确地测定内分泌干扰物的代谢行为，方法灵敏度高、稳定性好，适宜推广应用。

主权项

1.一种基于酶纳米反应器的内分泌干扰物电化学检测法，其特征在于，具体包括如下步骤：(1)以不同粒径功能化的二氧化硅作为模板，通过疏水性‑疏水性作用将其与氧化石墨烯混合:首先将氧化石墨粉末分散到水中并超声4h，再在3000rmp条件下离心30min得到浓度为0.5mg/mL的氧化石墨烯水溶液，然后按照体积比1:3比例将功能化的二氧化硅和氧化石墨烯水溶液在室温下混合12h得到复合材料；(2)向步骤(1)中得到的复合材料进行‑20℃冻干、冷冻干燥，然后在惰性气体中煅烧，再用5wt％的氢氟酸洗，得到石墨烯泡沫；(3)向步骤(2)中得到的石墨烯泡沫用水分散，通过加入浓度为1mg/mL的盐酸多巴胺溶液对石墨烯泡沫进行功能化修饰：按照体积比为20：1的比例往盐酸多巴胺溶液中加入石墨烯泡沫得到浓度为0.5mg/mL的PNGF纳米复合材料；(4)取一定量步骤(3)中得到的PNGF纳米复合材料，并将其作为酶纳米反应器放入离心管中，再往里加入活性酶，并在振荡器上混匀，滴在玻碳电极上待用；利用三电极体系即珀丝电极为辅助电极，饱和甘汞电极为参比电极，玻碳电极为工作电极，浓度为0.1M、pH＝7.0的磷酸盐缓冲液作为电解液，通过计时‑电流法每次往电解液中加入内分泌干扰物，用于检测内分泌干扰物。