[发明专利]一种高效表达犬圆环病毒Cap蛋白的方法在审
| 申请号： | 201810031395.X | 申请日： | 2018-01-12 |
| 公开（公告）号： | CN108264541A | 公开（公告）日： | 2018-07-10 |
| 发明（设计）人： | 孙文超;赵翠青;鲁会军;李霄;金宁一;田明尧;汪伟;曹亮 | 申请（专利权）人： | 温州大学 |
| 主分类号： | C07K14/01 | 分类号： | C07K14/01;C12N15/34;C12N15/70 |
| 代理公司： | 温州市品创专利商标代理事务所(普通合伙) 33247 | 代理人： | 程春生 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市瓯海*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高效表达犬圆环病毒(CanineCV)Cap蛋白的方法，以CanineCV基因组为模板序列，设计特异性引物，通过PCR扩增出Cap蛋白的完整序列，通过在线预测Cap蛋白的核定位信号，截取Cap蛋白N端26个氨基酸的核定位信号肽，并将缺失后Cap蛋白序列连接至pET‑28a载体，获得重组质粒pET(28a)‑Cap，将重组质粒转入BL21(DE3)感受态细胞后用IPTG进行诱导表达，SDS‑PAGE分析表明重组Cap蛋白在大肠杆菌BL21中获得了正确表达，以实现对犬圆环病毒Cap蛋白高效表达的目的。本发明的方法能成功克服CanineCV Cap蛋白在大肠杆菌中不表达或者表达量极低的难题，本发明表达的蛋白具有很好的免疫原性，可以应用于流行病学诊断方法的建立及其亚单位疫苗的研究。 | ||
| 搜索关键词： | 高效表达 圆环病毒 大肠杆菌 重组质粒 核定位信号肽 感受态细胞 核定位信号 特异性引物 亚单位疫苗 流行病学 免疫原性 模板序列 完整序列 序列连接 诱导表达 在线预测 表达量 基因组 氨基酸 截取 蛋白 转入 诊断 应用 分析 成功 研究 | ||
【主权项】：
1.一种高效表达犬圆环病毒Cap蛋白，其特征包括以下步骤：(1)以CanineCV基因组为模板序列，设计特异性引物，PCR扩增实现CanineCV去核定位信号肽的Cap蛋白序列；(2)将步骤(1)扩增获得的基因片段，连接到pET‑28a载体中，构建重组质粒pET(28a)‑Cap。(3)将步骤(2)获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21，然后利用IPTG进行诱导表达得到融合Cap蛋白。
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