[发明专利]一种非人灵长类脑卒中模型研发方法

摘要

本发明涉及临床科学研究技术领域，且公开了准备实验材料：18gage的针头、5F动脉套管、4F动脉造影导管、0.25mm动脉造影微导丝、数字减影血管造影(DSA)系统、MRI系统、核磁共振兼容呼吸机、核磁共振兼容生理信号检测系统。该非人灵长类脑卒中模型研发方法，通过血管内弹簧圈栓塞法精准制备了稳定的食蟹猴脑缺血再灌注动物模型，实验动物梗死面积适中且未出现再灌注后梗死区出血转化，动物能长期存活，具有相应神经功能缺损症状并通过长期影像学及行为的评估证明了模型的稳定性，采用该方法可以精确控制卒中的部位以及程度，且实验动物能够保持稳定的临床症状，因此，此模型适合进行脑卒中新疗法和新药物的安全性和有效性评估。

主权项

1.一种非人灵长类脑卒中模型研发方法，其特征在于，包括以下步骤：A1.准备实验材料：18gage的针头、5F动脉套管、4F动脉造影导管、0.25mm动脉造影微导丝、数字减影血管造影(DSA)系统、MRI系统、核磁共振兼容呼吸机、核磁共振兼容生理信号检测系统；A2.准备实验动物：五只青壮年食蟹猴，雄性，年龄6‑8岁，体重5‑6kg、五只老年食蟹猴，雄性，年龄大于10岁，体重大于10kg；A3.准备实验动物术前健康和基线检测与检查(baseline profiling check)，实验代谢参数，肝肾功能，CBC；采集额外的整份血清样本并保存，为了后期的生物标记分析；神经学基线评估(Baseline neurological assessment)；A4.局限性脑缺血模型的建立方法:选择6‑9岁体重相近的食蟹猴，实验动物备皮消毒，静脉麻醉后，采取头侧位，外导尿，给予心电血压监护，必要时面罩给氧，采用改良的Seldinger’s法穿刺右侧股动脉，置入4F动脉鞘，经鞘插入4F导管至右侧颈总动脉，行右侧颈总动脉正侧位造影，之后沿4F导管插入微导管及导丝至右侧大脑中动脉M1段中外1/3，造影确认位置准确后置入弹簧圈(2X6mm)致密栓塞2小时后退出弹簧圈并在特定时间点进行影像学、行为学、血液生化检查评估；A5.术后护理在手术后监测手术动物肛温，血压和心率48个小时，动物呼吸道要维持通畅的状态直到动物完全醒来；在术后介入设备要取出，按压穿刺点30分钟，然后用消毒绷带进行加压包扎；镇痛药物：注射叔丁啡0.01‑0.03mg/ml；抗生素：由于持续的外露伤口手术操作，在术前和术后都需要根据兽医的指导进行给药，药物选择需要有效对抗常见的能引起伤口感染的病原菌，例如：头孢菌素，术前半小时，术后5‑7天，在这种情况下：头孢哌酮钠100mg/kg,bid；液体供给：在兽医的指导对动物进行液体供给，动物恢复过程需要在恢复室进行，在此期间IV导管会保留，是为了液体供给，如果动物出现缺水症状，需要给动物每次静脉滴注100ml盐溶液，根据MRI显示的动物受伤程度，脱水治疗是为了降低颅内压；如果动物出现癫痫样式的痉挛，要给动物抗癫痫药；饮食：动物将接受补液疗法，直到恢复正常饮食；A6.术后跟进神经学的评估：在T2‑成像之前，在MCAO术后，每只动物都会根据常用的非人灵长类动物神经学评分量化表格得到评估，会有两个独立的在神经功能缺陷评估方面有经验的观察者各自评分，这个表格着重于运动机能，并且也会考虑行为变化(精神状态)和视觉的和脑神经的损伤，得分较低代表糟糕的功能产出；A7.MRI检查磁共振血管造影检查会在脑局部缺血后一个小时、再灌注后两个小时，以及MCAO和再灌注手术后24小时，在再灌注一个小时后进行T2液体衰减翻转恢复和磁共振弥散张量成像来观察局部缺血损伤和再灌注损伤，因为栓塞量是通过T2/Flair影像来衡量的，T2/Flair影像与组织学的评价具有高度相关性，梗塞损伤的评估完全基于T2影像。