[发明专利]一种木霉菌高效产孢的诱变与筛选方法

摘要

本发明涉及一种木霉菌高效产孢的诱变与筛选方法，属于微生物技术领域。具体步骤为木霉菌发酵培养；菌悬液制备；木霉菌紫外诱变处理；分生孢子和厚垣孢子高产菌株筛选；遗传稳定性检测；诱变株原有性能测定。本发明所述方法简便易行，成本低，可同时获得分生孢子和厚垣孢子高产菌株，且诱变株遗传稳定性好，是木霉菌获得高效产孢的一种有效方法。同时，诱变株可保持原有菌株降解四环素类抗生素的功能。所得到的高产孢菌株，可用于孢子产品制备和菌剂研发，也可用于四环素类抗生素污染环境的修复。

主权项

一种木霉菌高效产孢的诱变与筛选方法，其特征在于，通过如下操作步骤实现：(1)木霉菌发酵培养选取实验室保存的木霉菌LJ245(Trichoderma harzianum LJ245)作为出发菌株，该菌株已于2012年2月14日保存于中国普通微生物菌种保藏管理中心(简称CGMCC)，保藏号：CGMCC NO.5753，该菌株几乎不产分生孢子，将该菌株接种到马铃薯或马丁氏液体培养基中活化培养2d‑6d，得到发酵液；(2)菌悬液制备取上述发酵液10mL于三角瓶中，并加入50颗玻璃珠，震荡10min‑20min，然后用生理盐水按照1:10,1:100,1:1000比例，稀释成不同浓度，得到菌悬液；(3)木霉菌的紫外诱变处理取(2)中不同菌悬液，分别放到自制的紫外反应箱中，进行紫外照射诱变处理；(4)分生孢子和厚垣孢子高产菌株筛选取诱变后且经过暗培养后的菌株分别接种于固体培养基和液体培养基中进行培养，观察固体培养基上分生孢子产生情况，筛选出分生孢子高产菌株；统计液体培养基中厚垣孢子数量，比较分析不同诱变处理得到的菌株的产孢量，以筛选出具有高产厚垣孢子的菌株；(5)诱变菌株遗传稳定性检测将上述得到的分生孢子与厚垣孢子高产菌株分别接种到固体和液体培养基中，进行传代培养，并统计分生孢子与厚垣孢子的数量，得到遗传稳定性良好的诱变菌株；(6)诱变株原有降解抗生素性能测定菌株降解四环素类抗生素性能检测：将出发菌株与诱变菌株分别接种到四环素类抗生素为唯一碳源的液体培养基中培养，并测定抗生素降解率，获得诱变株降解抗生素性能；这里所述四环素类抗生素是指金霉素。