[发明专利]一种确定林麝取香时间的方法

摘要

本发明涉及林麝养殖领域，尤其涉及一种确定林麝取香时间的方法。本发明方法综合显微形态观测、干燥法分析含水量变化、气质联用技术及ELISA分析粪样激素变化等方法，通过将麝香样品的外观形态颜色、成分变化及与取香林麝粪样激素相关性动态变化进行系统对比，探索出了一套系统的多角度多层次林麝取香时间确定方法。利用本发明方法可以从不同侧面对麝香品质判定及确定最佳的取香时间提供科学依据，可用于掌握林麝麝香在分泌后熟化过程中变化情况，从而用来确定人工养殖林麝科学的取香时间，保障采集麝香品质。

主权项

1.一种确定林麝取香时间的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)麝香样品外观形态分析通过体视镜观察麝香外观形态，描述并记录麝香外观形态；(2)麝香样品水分含量测定a.准备200μl规格离心管，准确称重后在管中加入麝香样品，液体用移液器量取10μl，固体称取5-10mg；b.将装有样品的离心管称重，取一个相同规格的离心管，称重后加入10μl蒸馏水，再次称重后作为对照样品与麝香样品一同干燥；c.将所有待测样品和对照样品放置在离心管板上，打开离心管管口，置于装有足量硫酸钙、硫酸镁和硫酸钠的封闭干燥器中，静置干燥48h；d.当装有对照样品的离心管重量和空管重量相同时即表示干燥彻底，对所有离心管称重，计算麝香样品中的水分含量；(3)麝香样品主成分气质联用GC-MS色谱分析a.样品预处理：称取待检测的麝香样品，用预冷到-50℃的冷冻干燥机冷冻干燥12-24h，得到麝香冻干粉，称取上述麝香冻干粉0.05g，用无水CaSO4吸水干燥72h；b.向上述干燥后的麝香冻干粉样品中加1ml二氯甲烷萃取15min，过滤后得到GC-MS测试样品；c.气相色谱仪测试条件如下：进样方式：无分流进样；进样量：1μl；进样口温度：250-252℃；管柱温度：80℃，保持1分钟，之后每分钟增加5℃直至245℃，保持1分钟，之后每分钟增加10℃直至280℃，保持5分钟；载气：氦气；载气流速：1-1.05ml/min；总分析时间：60min；d.质谱仪测试条件如下：转接口温度：280-282℃；质谱室温度：230-232℃；四极杆分析器温度：150℃；(4)林麝粪便激素含量测定a.样品预处理：将林麝粪便样品充分研磨粉碎，称取0.50g放入10ml离心管中，加入5ml90％乙醇，振荡萃取20min后，2500rpm离心20min，取上清液，下层沉淀再加入5ml 90％乙醇振荡萃取20min，2500rpm再次离心20min，合并两次上清液并于60℃水浴蒸干，加入1ml PBS振荡回收，并置于-20℃冰箱中冷冻待测；b.采用放射性免疫法测定林麝粪便样品皮质醇激素，所用皮质醇试剂盒的参数为：灵敏度≤2.0ng/ml，批内变异系数<10％，批间变异系数<15％；c.采用发光免疫法测定林麝粪便样品睾酮和雌二醇激素，所用睾酮试剂盒和雌二醇试剂盒的参数为：回收率90-110％，分析内精密度<15.0％，批间精密度<20.0％；d.数据处理：将各月份采集麝香样品对应的林麝个体粪便睾酮、雌二醇和皮质醇测定数据进行整理，制做箱线图并计算相邻两月份激素水平的差异显著性。