[发明专利]一种体内扩增造血干细胞的方法

摘要

本发明公开一种体内扩增造血干细胞的方法，包括如下步骤：将转录因子MLL‑AF4体外转染到人的原代CD34+HSC中，进行体外Dox诱导，HSC移植，体内Dox诱导。本发明使得HSC体外扩增一直无法解决的技术瓶颈获得了突破，创新性地将HSC的体外扩增转为HSC的体内扩增，不仅高效而且作用持续，使体内的HSC造血能维持长达10个月以上，且保持正常状态。由于HSC的移植是目前治愈多种血液肿瘤、免疫缺陷疾病、血液遗传病和其他诸多疾病的唯一方法，本发明有望为HSC移植以及上述疾病的治疗带来新的思路，进而创造巨大的市场价值和临床应用价值。

主权项

1.一种体内扩增造血干细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：将转录因子MLL‑AF4体外转染到人的原代CD34⁺HSC中，进行体外Dox诱导，HSC移植，体内Dox诱导。

2.根据权利要求1所述体内扩增造血干细胞的方法，其特征在于，所述体外转染前包括原代HSC的体外培养步骤，培养体系如下：SCF(100ng/ml),TPO(100ng/ml),FLT3(100ng/ml),IL‑6(20ng/ml),和SR1(0.75μM)。

3.MLL‑AF4基因或蛋白在制备用于调节造血干细胞体内扩增的药物中的用途，所述调节是指促进造血干细胞在受治疗者体内的扩增和干性维持。

4.包含MLL‑AF4基因或其片段的质粒在制备用于调节造血干细胞体内扩增的药物中的用途，所述的调节是指促进造血干细胞在受治疗者体内的扩增和干性维持，所述造血干细胞在移植前用所述质粒进行体外转染。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述质粒为pTRE‑tight‑MLL‑AF4‑EGFP质粒，其构建方法如下：用肽段T2A进行MLL‑AF4与EGFP的连接，通过PCR克隆出MLL‑AF4‑EGFP的片段，然后将MLL‑AF4‑T2A‑EGFP片段插入到pTRE‑Tight质粒中的TRE启动子下游，进而构建得到pTRE‑tight‑MLL‑AF4‑EGFP质粒。

6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述体外转染的方法如下：将pTRE‑tight‑MLL‑AF4‑EGFP质粒和CAG‑rtTA质粒按照3：1的比例，用Nucleofector II进行电转。

7.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，转染后的细胞继续在培液中培养，同时添加2ug/ml的doxycycline，维持48～72小时。