[发明专利]一种与肾病相关的肠道菌群代谢物的检测方法

摘要

本发明公开了一种与肾病相关的肠道菌群代谢物的检测方法，涉及分析化学在临床医学研究中的应用。具体步骤为，取血清样本，加入甲醇，涡旋提取代谢物，取上清冻干后用少体积甲醇水溶液复溶，经液相色谱三重四级杆质谱联用仪检测分析。本发明的检测方法简便快捷，重复性好，灵敏度高，能够准确对血清中与肾病相关的肠道菌群代谢物进行定量，可以为肾病发生发展与肠道菌群代谢物的变化研究提供帮助。

主权项

1.一种与肾病相关的肠道菌群代谢物的检测方法，其特征在于，包括如下流程步骤：(1)取血清样本40‑100μL，加入160‑400μL提取剂甲醇，该提取剂甲醇中溶解有左旋肉碱‑d3及马尿酸‑d5内标，涡旋，离心吸取上清液冻干；(2)向冻干物中加入50‑100μL甲醇水溶液复溶，离心取上清液后利用液相色谱质谱联用仪分析；步骤(2)中采用的液相色谱分离条件为：采用五氟苯基色谱柱，规格为长度150mm、内径2.1mm、粒径3μm，流速0.2‑0.35mL/min，柱温35‑45℃，进样体积为0.1‑5μL；流动相A相为含0.1％体积甲酸的水溶液，B相为含0.1％体积甲酸的乙腈溶液，采用梯度洗脱，起始流动相为体积浓度0％B，维持2min，然后在3min内线性升高到25％B，接着在6min内继续升高到35％B，然后在4min内继续升高到95％B，维持3min，然后在0.1min内恢复到0％B，平衡4min；步骤(2)中采用的质谱为三重四级杆串联质谱，质谱检测条件为：采用电喷雾源正负离子同时采集模式，离子源接口电压4.0kV，雾化气为氮气，流速3L/min，干燥气同为氮气，流速为10L/min，加热气为空气，10L/min，碰撞气为氩气，压力为270KPa，脱溶剂管温度250℃，加热模块温度400℃，多反应监测模式采集参数为：三甲胺N‑氧化物离子对76>58.15，碰撞能‑22V，N‑苯乙酰基‑L‑谷氨酰胺离子对265.1>129.95，碰撞能‑14V，马尿酸离子对180.1>105.05，碰撞能‑13V，苯乙酰甘氨酸离子对194.1>91.05，碰撞能‑26V，肉桂酰甘氨酸离子对206.1>131.05，碰撞能‑11V，硫酸吲哚酚离子对212>79.9，碰撞能20V，对甲酚硫酸盐离子对187>106.95，碰撞能20V，左旋肉碱‑d3离子对165.1>85.15，碰撞能‑21V及马尿酸‑d5离子对185.2>110.2，碰撞能‑13V。