[发明专利]一种从人母乳样本中提取微生物MetaDNA的方法

摘要

本发明公开了一种从人母乳样本中提取微生物MetaDNA的方法，包括以下步骤：步骤一，提取母乳样本；步骤二，离心浓缩样本；步骤三，裂解样本；步骤四，离心柱结合；步骤五，高盐溶液洗涤；步骤六，洗涤静置；步骤七：DNA回溶。本发明通过使用QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit DNA快速提取试剂盒，不会影响样本中DNA的提取量、完整性、肠道菌群丰度和多样性指数的检测结果，保证了数据的准确性，通过使用市面上常见的QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit试剂盒，进行提取流程的优化和改进，最终提取出母乳中的微生物Meta DNA，并且通过PCR进行了鉴定，以证明该方案的可行，本发明的提取成功率极高，保证了实验数据的准确性，极大的提高了提取过程的效率，同时减少了不必要的资源浪费。

主权项

1.一种从人母乳样本中提取微生物MetaDNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一，提取母乳样本：将母乳样本放置在样本微生物提取试剂盒中存储，并分装40μL蛋白酶K至一个灭菌的2.0ml离心管中；步骤二，离心浓缩样本：a:室温解冻母乳样本，震荡混匀，准备另一个新的灭菌的2.0ml离心管分装1ml的母乳样本，85mg样本在微量离心机中离心10min；b:离心后，样本将分为三层，最上层为黄白色的脂肪层，中间为澄清的液体，最下层为白色的沉淀，吸取800μL样本中间层到分装好的蛋白酶K的离心管中，上下颠倒混匀；步骤三，裂解样本：a:向离心浓缩完成后的混合溶液中加入800μL Buffer AL，涡旋震荡，充分混匀15s；b:使用加热器70℃孵育10min；c:从加热器中取出样本管，震荡混匀，分装成两管，每管820μL；d:每管样本加入820μL无水乙醇，涡旋震荡15s充分混匀，放入‑20℃冰箱冷处理15min；步骤四，离心柱结合：将冷处理后的样本溶液转移700μL至纯化柱中过柱，12500rcf离心30s，离心后弃废液和收集管，转移纯化柱至新的收集管中，继续将冷处理后的样本溶液转移700μL至纯化柱中过柱，直至溶液全部过柱；步骤五，高盐溶液洗涤：a:向纯化柱中加入500μL Buffer AW1，20000rcf离心1min,弃去废液和收集管，转移纯化柱至一个新的收集管中；b:向纯化柱中加入500μL Buffer AW2，20000rcf离心1min，弃去废液和收集管，转移纯化柱至一个新的收集管中；步骤六，洗涤静置：a:对收集管进行空甩，20000rcf离心2min，将纯化柱转移至新的贴好标签的1.5ml离心管中，室温晾干3min；b:吸取32μL EB溶液到纯化柱底部，室温静置2min；步骤七：DNA回溶：将纯化柱和离心管在20000rcf下离心2min，离心后取下装有DNA溶液的离心管，标记好后于‑20℃保存。