[发明专利]一种人脂肪干细胞的获取分离培养方法和干细胞库的构建方法

摘要

本发明提供了一种人脂肪干细胞的获取分离培养方法和干细胞库的构建方法，该分离培养方法包括人脂肪组织的采集；人脂肪组织的处理；人脂肪干细胞的消化；人脂肪干细胞的培养，干细胞库的构建方法包括人脂肪干细胞的获取分离培养；对获取的每一份人脂肪干细胞进行ID编号，记录获取每一份人脂肪干细胞的供者信息，将ID编号与供者信息进行链接形成细胞信息档案保存至数据库中，即形成人脂肪干细胞库。本发明提供的人脂肪干细胞的分离培养方法中不仅脂肪组织效果更加彻底，而且培养时间短，在培养过程中，特定的培养基能够使细胞增殖更快，干细胞纯度更高，细胞在培养过程中没有出现干细胞分化现象，细胞冻存过程中存活率更高。

主权项

一种人脂肪干细胞的获取分离培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：S1、人脂肪组织的采集：在无菌环境下采集供者的脂肪组织，置于体积比为3‑4:1‑2的0.9％的氯化钠注射液中清洗干净，去除坏死组织和结缔组织，将脂肪组织剪成0.5‑3.5mm3大小；S2、人脂肪组织的处理：将脂肪组织收集于离心管中，在1800‑2200rpm/min的条件下离心处理15min，收集上层部分的脂肪层，并用PBS洗涤；S3、人脂肪干细胞的消化：加入等体积的消化酶在温度为30‑37℃的环境下进行20‑45min的消化处理，加入等体积的含10％血清的DMEM完全培养基终止消化，静置20min后，去掉上层，在1200‑1500rpm/min的条件下离心5‑8min，弃上清，收集下层的人脂肪干细胞；S4、人脂肪干细胞的培养：将人脂肪干细胞以2×106细胞/瓶的密度接种于盛有培养基的培养瓶中，在温度为30‑37℃，5％CO2饱和湿度的培养箱中培养即完成对人脂肪干细胞的扩大培养。