[发明专利]一种可视快速检测食源性致病菌的试剂盒及其方法

摘要

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种可视快速检测食源性致病菌的试剂盒及其方法，采用多重环介导等温扩增结合胶体金免疫层析法同时检测食品中副溶血性弧菌、沙门氏菌和单增李斯特菌三种食源性致病菌，其包括引物、LAMP扩增反应体系和胶体金免疫层析三重检测试纸；本发明将LAMP的高灵敏度和胶体金免疫层析方法快速简便的优点结合起来，同时检测分析出三种食源性致病菌，实现对所扩增的目标核酸片段的特异性检测，从而最终建立食源性致病菌的LAMP‑胶体金免疫层析快速检测鉴定的新方法。

主权项

1.一种可视快速检测食源性致病菌的试剂盒，其特征在于，采用多重环介导等温扩增结合胶体金免疫层析法同时检测食品中副溶血性弧菌、沙门氏菌和单增李斯特菌三种食源性致病菌，其包括引物、LAMP扩增反应体系和胶体金免疫层析三重检测试纸；(1)引物：包括含FIP、BIP、F3、B3、LoopF和LoopB，其中BIP引物标记上FITC抗体，LoopB引物标记上荧光探针；引物序列如下：tlh‑FIP：CTGTCACCGAGTGCAACCACTT‑AACCACACGATCTGGAGCA；tlh‑BIP‑FITC：GCATCACAATGGCGCTTCCC‑ACCGTTGGAGAAAGTGACCTA，5’端标记荧光素；tlh‑F3：CGCTGACAATCGCTTCTCAT；tlh‑B3：GTTCTTCGCTTTGGCAATGT；tlh‑LF：CTGCATTGCTGCGTCGT；tlh‑LB‑Bio：TAACCCGAACAGCTGGTTCT，5’端标记生物素；invA‑FIP：GCATCCGCATCAATAATACCG‑CTCTGGATGGTATGCCCGG；invA‑BIP‑FITC：GAACGGCGAAGCGTACTGGAA‑CATCGCACCGTCAAAGGAA，5’端标记荧光素；invA‑F3：GTTGTCTTCTCTATTGTCACCGTGGT；invA‑B3：CCGCCAATAAAGTTCACAAAGAT；invA‑LF：TCTGGATGGTATGCCCGGT；invA‑LB‑TEX：CATCGCACCGTCAAAGGAA，5’端标记德克萨斯红；iap‑FIP：AGGTTTTGCTTGAGATTCAGAGAT‑TAATCTCCCTTCCACGTACT；iap‑BIP‑FITC：TTGACTATGGTAGCGGAATTTCTC‑TTAACGCCATTGTCTTGC，5’端标记荧光素；iap‑F3：CTGGTTACACTAAATATGTATTTGC；iap‑B3：GCCGTGGATGTTATCGTAT；iap‑LF：GTAGTGCTAGCGTATTGTGCG；iap‑LB‑DIG：GGTATCTACGTTGGTAATGGTCAA，5’端标记地高辛精；(2)LAMP扩增反应体系：每25μl反应液含2.5μl 10×的缓冲液，3.5μl dNTP混合液(每一种10mM)，3.9μl引物混合物，其中每组引物各加1.3μl，1μl Bst聚合酶，1μl DNA样品，无菌去离子补余；(3)胶体金免疫层析三重检测试纸：试纸由缓冲液垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组成。