[发明专利]一种能提高酿酒酵母细胞渗透压耐受性的小麦面筋蛋白肽的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种能提高酿酒酵母细胞渗透压耐受性的小麦面筋蛋白肽的制备方法及应用。本发明以小麦面筋蛋白为原料，经双螺杆挤压机挤压、均质预处理、酶解、醇沉以及大孔树脂柱层析，制备得到能提高酿酒酵母细胞渗透压耐受性的小麦面筋蛋白肽。本发明制得的小麦面筋蛋白肽能显著提高酿酒酵母细胞的渗透压耐受性，将其应用于高浓度或高密度发酵过程中，可有效地提高酿酒酵母细胞的渗透压耐受性、细胞活性和出芽率。

主权项

1.一种提高酿酒酵母细胞渗透压耐受性的小麦面筋蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)小麦面筋蛋白的预处理：将小麦面筋蛋白经双螺杆挤压机挤压后，再加水混合，均质，得到小麦面筋蛋白料液；

(2)小麦面筋蛋白的酶解：将小麦面筋蛋白料液加热后，调节体系pH值，再加入蛋白酶，恒温搅拌下进行酶解；酶解完成后，灭酶，冷至室温，离心，去除沉淀，得到小麦面筋蛋白酶解清液；

(3)小麦面筋蛋白酶解清液的醇沉处理：将小麦面筋蛋白酶解清液减压浓缩后，加入无水乙醇进行醇沉除去大分子蛋白和多肽，上清液经冷冻干燥，得到小麦面筋蛋白醇沉清液冻干粉；

(4)柱层析：将小麦面筋蛋白醇沉清液冻干粉溶解于水后装入大孔树脂层析柱，用水洗脱，得到的洗脱液经冷冻干燥，得到所述能提高酿酒酵母细胞渗透压耐受性的小麦面筋蛋白肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述双螺杆挤压机挤压的工艺条件为：加入小麦面筋蛋白质量10～20％的水混合后，在螺杆转速150～300r/min下挤压，挤压温度为70～140℃，出料模孔直径5mm；经双螺杆挤压机挤压后的小麦面筋蛋白与水的混合质量比为1～4∶10。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述加热是加热至40～50℃；所述调节体系pH值是调节体系pH值为6.0～9.0。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述蛋白酶为中性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、Alcalase2.4L碱性内切蛋白酶和碱性蛋白酶中的一种；所述蛋白酶的加入量为小麦面筋蛋白质量的1～2％。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述酶解的时间为12～36h。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述灭酶是在95～100℃下加热10～20min；所述离心的转速为3000～5000rpm，离心的时间为5～15min。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述减压浓缩是在温度40～50℃、真空度0.08MPa～0.1MPa条件下，浓缩2～4h。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述无水乙醇加入量为：使无水乙醇与浓缩液的混合液中，乙醇浓度达到70～90wt％。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述大孔树脂为型号为AB‑8、DA‑201E或XAD‑16的大孔树脂；所述大孔树脂的质量为小麦面筋蛋白醇沉清液冻干粉的质量的10～20倍；所述洗脱液为层析柱体积的2～4倍。

10.由权利要求1～9任一项所述制备方法制得的能提高酿酒酵母细胞渗透压耐受性的小麦面筋蛋白肽应用于提高高浓度或高密度发酵过程中酿酒酵母细胞的渗透压耐受性、细胞活性和出芽率。