[发明专利]一种体外扩增和规模化培养间充质干细胞的方法

摘要

本发明公开了一种体外扩增和规模化培养间充质干细胞的方法，包括以下具体步骤：步骤一：脐带处理：将脐带用D‑Hank’s液冲洗3～5次后用剪刀剪碎成约0.7～1.0mm³的小块；步骤二：消化：将步骤一中所制得的脐带块加入0.1％胶原酶Ⅱ消化30～35分钟，然后再加入0.25％胰酶进行消化30～35分钟。本发明通过选取新生儿所产生的脐带，可以将脐带变废为宝，同时脐带间充质干细胞病毒感染机会小，对供者和患者无不良影响，而且间充质干细胞增值能力强，为建立间充质干细胞库提供了良好的基础，同时各个步骤中外界条件和时间容易监控和控制，避免了不良环境对培养和扩增造成影响，从而保证了间充质干细胞的生长过程免受外界影响，以此提高间充质干细胞的培养和扩增速率。

主权项

1.一种体外扩增和规模化培养间充质干细胞的方法，其特征在于，包括以下具体步骤：步骤一：脐带处理：将脐带用D-Hank’s液冲洗3～5次后用剪刀剪碎成约0.7～1.0mm3的小块；步骤二：消化：将步骤一中所制得的脐带块加入0.1％胶原酶Ⅱ消化30～35分钟，然后再加入0.25％胰酶进行消化30～35分钟；步骤三：离心：将步骤二中的溶液倒入离心机中，离心机离心20～25分钟，然后取中间白膜层，并且加入PBS洗涤2次；步骤四：培养：将步骤三洗涤后的细胞接种于20％～40％胎牛血清培养液Ⅰ中，然后置于37℃、5％二氧化碳和饱和湿度的培养箱中进行培养，静置2～3天；步骤五：培养液更换：将步骤四中静置2～3天后的培养液Ⅰ内的培养液进行更换，并且去除非贴壁细胞，同时每隔2～3天进行换液一次；步骤六：消化：在步骤五进行之后，将培养液放置于显微镜下观察，当观测到待贴壁细胞80％～90％后，加入0.25％胰酶消化；步骤七：传代培养：用吸管从步骤六消化后的溶液中吸取适量的细胞，并且以2*104/ml密度接种于20％～40％胎牛血清培养液Ⅱ中进行传代培养，置于37℃、5％二氧化碳和饱和湿度的培养箱中进行培养，静置2～3天，然后进行步骤五和步骤六，以此类推。