[发明专利]一种降低苹果外植体褐变率的培养方法

摘要

本发明涉及一种降低苹果外植体褐变率的培养方法。特征在于通过总酚含量连续测定法确定苹果外植体的采集培养时机，以此降低苹果外植体的褐变率；于苹果开始发芽时，每隔7天，采集1～2cm的茎段，用液氮研磨后，称取样品，采用福林酚法测定枝条中总酚含量；直至连续两次测定的总酚含量值之间变化幅度为0～10％。本发明技术方法，操作技术简单，外植体进瓶褐变率低，褐变率仅为10％以下；污染率低，污染率8％以下；成活率高，苹果外植体成活率可达到90％以上。本发明技术方法应用范围广，适用于绝大多数苹果品种。

主权项

1.一种降低苹果外植体褐变率的培养方法，特征在于：

通过总酚含量连续测定法确定苹果外植体的采集培养时机，以此降低苹果外植体的褐变率；

所述总酚含量连续测定法的具体测定过程为：

于苹果开始发芽时，每隔7天，采集1～2cm的茎段，用液氮研磨后，称取样品，采用福林酚法测定枝条中总酚含量；直至连续两次测定的总酚含量值之间变化幅度为0～10％。

2.如权利要求1所述的一种降低苹果外植体褐变率的培养方法，特征在于：

培养方法包括以下具体步骤：

(1)总酚含量连续测定：

于苹果开始发芽时，每隔7天，采集1～2cm的茎段，用液氮研磨后，称取样品，采用福林酚法测定枝条中总酚含量；直至连续两次测定的总酚含量值之间变化幅度为0～10％时，采集苹果茎段作为外植体；

(2)田间幼芽采集：选取当年生苹果幼芽，采集未木质化茎段，去除除顶芽外全部叶片，备用；

(3)外植体消毒：将外植体用流水冲洗3～5h后，进行消毒处理；

(4)初代培养：将步骤(3)中的外植体转接入初代组织培养基中，并置于人工气候室中的培养架上进行光照培养，直至诱导丛生芽萌发。

3.如权利要求2所述的一种降低苹果外植体褐变率的培养方法，特征在于：

所述步骤(2)中，田间幼芽采集时间为：春季4～6月，茎段采集长度5cm～7cm。

4.如权利要求3所述的一种降低苹果外植体褐变率的培养方法，特征在于

所述步骤(3)中，消毒方法为采用75％酒精消毒50s，灭菌水冲洗1次，0.1％Hgcl₂消毒8～13min，灭菌水冲洗5次。

5.如权利要求4所述的一种降低苹果外植体褐变率的培养方法，特征在于

所述步骤(4)中，所述初代组织培养基的配方为：MS+6‑BA0.4mg/L+IBA0.1mg/L+琼脂粉6.0g+蔗糖30g，PH5.7。

6.如权利要求5所述的一种降低苹果外植体褐变率的培养方法，特征在于

所述步骤(4)中，所述人工气候室中的培养环境为：温度25±2℃，光照3000lx，光照16h。