[发明专利]一种基于大肠埃希氏菌快速筛选电子烟液的方法

摘要

本发明涉及一种基于大肠埃希氏菌快速筛选电子烟液的方法，属于电子烟研发技术领域。本发明将体外抑菌检测法和烟液调配技术组合，首先制备含不同植物提取物的烟液，采用微量稀释抑菌检测技术对所制备的烟液进行筛选，获得具有抑菌活性的烟液。本发明方法的特点在于：采用大肠埃希氏菌作为测试菌株，确定了适用于电子烟液的微量稀释抑菌检测体系，筛选检测效率高，可在较短时间内获得具抑菌活性的烟液配方，为安全、高品质电子烟液的获得提供有效技术支持。

主权项

1.一种基于大肠埃希氏菌快速筛选电子烟液的方法，其特征在于：该方法将体外抑菌检测法和烟液调配技术组合，用于快速筛选电子烟液，具体步骤如下：（1）受试电子烟液样品的制备称取基础电子烟液样品10.0g，根据感官评吸效果确定植物提取物的添加量，添加量范围（0.01～0.50）g，对照组为基础电子烟液。（2）抑菌活性的测定1）菌株活化培养：自液氮罐中取出冻存的菌株，置于37℃水浴中快速融解得到复苏菌液；将复苏菌液以1.0%（v/v）的比例接种于灭菌营养肉汤培养基中，置于恒温水浴摇床中36℃，120rpm培养16～20h，获得第1次活化菌液；再将第1次活化菌液以1.0%（v/v）的比例接种于灭菌营养肉汤培养基中，然后置于恒温水浴摇床中36℃，120rpm培养16～20h，得到第2次活化菌液；2）菌液浓度测定：（a）取1mL第2次活化菌液，加入9mLPBS缓冲液，制成1:10的菌菌悬液；（b）按照（a）的操作，制备10倍系列稀释菌悬液；（c）选取上述10倍系列稀释菌悬液中的3个稀释度，取1mL加入无菌平板中，然后加入20mL营养肉汤琼脂培养基，混合均匀，置于隔水式恒温培养箱中36℃培养16～20h后，计数平板上的菌落数，乘以稀释倍数计算得到第2次活化菌液的浓度；3）测试菌悬液制备：根据第2次活化菌液浓度，计算并在双倍浓度营养肉汤培养基中加入第2次活化菌液，制成测试菌悬液，大肠埃希氏菌浓度为104‑106CFU/mL；4）加样：在无菌96孔培养板上设置对照组、空白组和实验组；对照组和空白组中加入100μLPBS缓冲液，实验组加入100μL不同稀释倍数的电子烟液；空白组中加入100μL双倍浓度营养肉汤培养基，对照组和实验组中加入100μL测试菌悬液，每组6孔平行；5）培养：将96孔培养板置于隔水式恒温培养箱中，36℃培养16～20h；6）MTT孵育：取出培养后的96孔培养板，置于微孔板离心机10,000 rpm室温离心5min，弃掉上清液；加入1.5～2.0mg/mL的MTT溶液，100 μL/孔，置于微孔板振荡器上36℃振荡5min，然后置于36℃隔水式恒温培养箱内孵育1.0～1.5h；7）吸光值测定：取出孵育后的96孔培养板，置于微孔板离心机10,000 rpm室温离心5min，弃掉上清液；加入DMSO，200μL/孔，置于微孔板振荡器上36℃振荡5min；静置后，置于酶标仪上测定570nm下对照组、空白组和实验组吸光值的吸光值；（3）抑菌活性计算电子烟液的抑菌活性采用抑菌率I表示，根据吸光值，按照公式（1）计算，公式如下：式中：I—抑菌率；ODn—实验组的平均吸光值；ODo—空白组的平均吸光值；ODc—对照组的平均吸光值。