[发明专利]一种利拉鲁肽中间体多肽的制备方法有效
| 申请号： | 201810119330.0 | 申请日： | 2018-02-06 |
| 公开（公告）号： | CN108191981B | 公开（公告）日： | 2020-11-03 |
| 发明（设计）人： | 潘尚书;汤传根;李宬;刘晓锐;崔怀言;陈松;张昊宁 | 申请（专利权）人： | 美药星（南京）制药有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21 |
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| 地址： | 210038 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于多肽制备方法技术领域，特别涉及一种利拉鲁肽中间体多肽GLP‑1(7‑37)的制备方法。其主要步骤包括构建重组利拉鲁肽工程菌，通过大肠杆菌诱导以包涵体形式表达利拉鲁肽中间体融合蛋白，再经过变性、复性、酶切和分离纯化得到利拉鲁肽中间体多肽GLP‑1(7‑37)。此发明通过改变重组序列信号肽，表达方式变为胞内不溶性包涵体表达，表达量大大增加；洗涤后的包涵体采用碱溶，无需使用大量的变性剂，以蛋白浓度为20‑30g/L的高浓度加入包涵体溶解缓冲液，变复性时间不超过1h，溶解后既可以酶切；减少了工序，缩小操作体积，降低试剂成本，利于工业化放大；采用UniSP‑50XS阳离子交换分离纯化，分离度高。本发明制备的利拉鲁肽中间体多肽纯度达到87％以上，收率大于85％。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利拉鲁肽 中间体 多肽 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白为Leading Peptide‑DDDDK‑GLP‑1(7‑37)，包含SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，在利拉鲁肽制备中，采用如下前导肽：MATKAVSVLKGDGX1VQGIINFEQKESNGX2VKVWGSIKGLX3EGLHGFHVHKFVNQHLCGX4HLVALX5LV，X1,X2：为P和Y中的任何一个氨基酸；X3,X4和X5：为S,T和Y中的任何一个氨基酸。
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