[发明专利]多重乙肝疫苗及其制备方法

摘要

本发明涉及多重乙肝疫苗的制备方法，包括以下步骤：1)先采用包埋法制备脂质体，再制备含有HBsAg的质粒脂质体，然后制得HBsAg质粒脂质体冻干粉；2)将所得的冻干质粒脂质体，及佐剂、寡肽，置于海藻酸钠水溶液中，充分混合均匀，缓慢滴入到含有氯化钙的壳聚糖溶液中,磁力搅拌,离心弃上清液，蒸馏水洗涤数次，干燥，即得壳聚糖微球；3)在壳聚糖微球和抗‑HBs中加入交联剂戊二醛，保持40℃恒温水浴条件，充分搅拌反应，反应结束后，静置至完全分层，弃上清液，下层物质分别用异丙醇和石油醚洗涤，烘干，即得交联微球；本发明制得的多重乙肝疫苗显著提升了疫苗的免疫应答能力，稳定性较好。

主权项

1.一种多重乙肝疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)冻干HBsAg质粒脂质体的制备将卵磷脂、胆固醇按3:1-5:4摩尔比，置于圆底烧瓶中，加入一定量的有机溶剂溶解，然后在37℃水浴中旋转蒸发，除去有机溶剂，形成磷脂膜；然后加入一定量的0.01-0.05MpH7.4PBS-HBsAg质粒溶液，PBS-HBsAg质粒溶液中的脂质体与HBsAg质粒的体积比为5:1-20:1，继续旋转蒸发至形成乳白色、均匀的脂质体悬液，45℃水浴6h后轻微漩涡混合1min，再用微孔滤膜过滤，得质粒脂质体样品；在质粒脂质体样品中加入抗冻剂，混合后立即在-80℃快速预冻后，再进行冷冻干燥，-20℃保存备用，经55000r/min超速冷冻离心1.5h，即得冻干质粒脂质体；2)壳聚糖微球的制备将步骤1)所得的冻干质粒脂质体，以及一定量的佐剂、寡肽，置于1-1.5％的海藻酸钠水溶液中，充分混合均匀，缓慢滴入到含有5-10g/L氯化钙的壳聚糖溶液中,磁力搅拌30min以上,离心弃上清液，蒸馏水洗涤数次，干燥，即得壳聚糖微球；3)交联微球的制备在步骤2)所得的壳聚糖微球和抗-HBs中加入一定量的交联剂戊二醛，保持40℃恒温水浴条件，充分搅拌反应，反应结束后，静置至完全分层，弃上清液，下层物质分别用异丙醇和石油醚洗涤3次以上，50℃烘干过夜，即得交联微球。